紫菜藻胆蛋白的制备及其体外模拟消化研究

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藻胆蛋白是紫菜等某些藻类特有的重要捕光色蛋白，分为藻红蛋白（ＰＥ）、藻蓝蛋白（ＰＣ）、藻红蓝蛋白（ＰＥＣ）和别藻蓝蛋白（ＡＰＣ）４大类，有的藻类中蛋白质的含量可以高达细胞干重的２５％～２８％［１＿２］．藻胆蛋白在食品、化妆品、医药、生物工程等领域有广泛的应用与开发利用价值。

条斑紫菜是江苏沿海主要的养殖海藻．目前其主要的利用途径是制成紫菜干品供直接食用。紫菜不仅具有独特的风味和营养价值，而且在《本草纲目》中记载了其独特的药用价值，现代科学研究还表明紫菜具有降血脂、抗凝血、抗肿瘤、抗辐射等生理活性［３－５１。多年来，对紫菜蛋白质的研究主要集中在藻胆蛋白的提取、纯化与生物活性［６－７１，以及蛋白质的酶解技术与酶解物的生物活性等方面ｉｓ－９］，对紫菜藻胆蛋白在人体中模拟消化情况尚未见研究报道。干紫菜中含有３０％～４０％的蛋白质，作为食品食用时人体的消化利用情况是决定其营养价值的主要条件。目前，研究食物消化主要有体外法和体内法，体内法复杂、时问长、费用高，体外模拟消化法是根据人体胃肠消化液的主要成分与消化环境，在体外建立模拟胃肠消化体系，利用精制的消化酶在试管内进行的消化实验，可近似反映人体胃肠对食物的消化状况［ｔｏ－Ｈ］。

作者首先确定紫菜中藻胆蛋白的制备方法，再采用人工胃液、人工肠液进行体外消化试验，根据游离氨基酸的生成量、消化产物的生物活性和ＳＤＳ—ＰＡＧＥ图谱考察紫菜藻胆蛋白的消化情况，以期初步明确紫菜藻胆蛋白的模拟消化特性。

基（ＤＰＰＨ）：美国Ｓｉｇｍａ公司产品；三氯乙酸（ＴＣＡ）、邻苯二甲醛（ＯｅＡ）、考马斯亮蓝、赖氨酸：均为国产分析纯。１．２仪器

Ｔ６新世纪紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司产品；ＰｒｉｍｏＲ多用途台式高速冷冻离心机：美国热电公司产品；全自动酶标仪：美国Ｂｉｏ—Ｔｅｋ公司产品；Ｅ２００生物显微镜：日本Ｎｉｋｏｎ公司产品；ＪＳＭ一６３９０ＬＡ电子扫描显微镜：日本电子株式会社产品；ＤＹＹ一２４１电泳仪：北京六一电泳仪厂产品；ＫＳ一３００超声波细胞粉碎机：宁波科生仪器厂产品。

１．３方法

１．３．１

紫菜藻胆蛋白制备

ｇ：５０

准确称取一定量干紫

菜于烧杯中，以１ｍＬ的比例加入蒸馏水，充分

混匀后，使用适当方法进行处理，使紫菜细胞受到一定程度的破坏，从而释放其中蛋白质。以４

０００ｒ／

ｒａｉｎ离心２０ｒａｉｎ，取上层清液，将残渣加少量水重复溶解后重复离心１次，合并上清液并定容。将紫菜藻胆蛋白溶液加入（ＮＨ。）：ＳＯ。粉末，使其饱和度达到６０％，混匀后静置盐析３０

１５

ｒａｉｎ，８０００

ｒ／ｍｉｎ离心

ｒａｉｎ，倾去上清液，加入适量磷酸缓冲液溶解沉淀

紫菜藻胆蛋白提取率计算

藻胆蛋白提取

蛋白，定容后保存于冰箱中备用。

１．３．２

率以提取液中蛋白质质量占样品原料总质量来表示，按下式计算：

蛋白提取率（％）＝（ｍ，／ｍ。）ｘ１００％

式中：ｍ。为提取液中蛋白质质量（ｍｇ）；ｍ。为样

品原料质量（ｍｇ）。

１．３．３显微镜观察与电镜扫描

光学显微镜观察：

１．１材料与试剂

条斑紫菜：购于本地紫菜加工企业，实验室中将其５０℃烘干至质量恒定，高速粉碎机粉碎，１００目过筛后超临界ＣＯ：流体萃取脱除脂肪，储于广口瓶中干燥保存。

胰蛋白酶（酶活２．５ｘ１０５Ｕ／ｇ）、胃蛋白酶（酶活

力３ｘ１０６Ｕ／ｇ）：美国ＢＢＩ试剂公司产品：蛋白

将蛋白质提取并离心后的残渣加入２０倍的蒸馏水，混匀后取少量制作成玻片，置于显微镜下观察，放大倍数为１０ｘ１００，拍照。

电子扫描显微镜观察：将处理后的紫菜叶片切取约０．５

ｅｍｘ０．５ｅｍ，０．１

ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液清洗３

次，体积分数５０％、７０％、８０％、９０％、９５％梯度丙酮各１次，各１５ｒａｉｎ，１００％丙酮加无水硫酸钠２次，体积分数各１０ｒａｉｎ，丙酮与乙酸异戊酯２：１、Ｉ：Ｉ、１：２混合

Ｎｏ．４２０１４

Ｍａｒｋｅｒ：ＴａＫａＲａ生物工程公司产品；二苯代苦味酰

４０４

Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ

Ｆｏｏｄ

Ｓｃｉｅｎｃｅ

ａｎｄ

Ｖ０１．３３

Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ