GST蛋白纯化

试剂配制 缓冲液的配制： 用来配缓冲液的水及化学试剂纯度要求很高,建议试剂配好后,用0.45μm滤膜过滤。 结合液：PBS,pH7.3(140mM NaCl,2.7mM KCl,10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4,pH7.3) 洗脱液：50mM Tris-HCl,10mM还原性谷胱甘肽,pH8.0) 注意：结合液和洗脱液中可以含有1-10mM DTT。

GST bestarose 4FF说明书 默认分类 2010-01-18 09:32:34 阅读257 评论0 字号：大中小

GST bestarose 4FF是专门用于纯化pGEX系列载体表达的GST标签蛋白，其它谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用蛋白的分离介质，操作简单，快速。

GST bestarose 4FF 可直接从预处理的细胞裂解物中纯化GST-tagged蛋白，纯化条件温和，可以保证蛋白的生物活性。

GST bestarose 4FF 具有高流动性，易于放大，GST bestarose 4FF有快速方便的预装柱，Ez-Fast bestarose 4FF 1ml和5ml。

介质性能

谷胱甘肽是通过10碳原子的连接臂偶联到4%高度交联的琼脂糖上。最优的偶联作用使介质具有高GST-tagged蛋白及与谷胱甘肽相互作用蛋白的结合能力。

总的蛋白结合能力约为每毫升填料结合10mg标签蛋白，动态结合能力随着外界因素改变，如不同的目标蛋白，流速等等。

如果需要去除GST部分（天然蛋白分子量为26KD），当蛋白吸附在柱上，或在洗脱后用位点专一的蛋白酶消化，选用前种方法，可减少额外分离目的蛋白与GST步骤，消化后，目的蛋白直接用结合液洗脱即可。

表1 GST bestarose 4FF性能

配体 谷胱甘肽与10碳原子连接臂

配体浓度 120-320μmol谷胱甘肽/ml填料

蛋白结合能力 ≈ 10mg重组GST-tagged蛋白/ml填料，GST，Mr26000

动态结合能力 ≈11mgGST-tagged蛋白/ml填料，Mr43000

平均颗粒大小 90μm

组成 4%高度交联的琼脂糖

最大流速* 450cm/h（15ml/min），XK层析柱，柱高5cm,水溶性缓冲液，室温纯化 建议的流速** 上样：＜100cm/h（＜3ml/min ，XK层析柱）

洗涤与洗脱：100-300cm/h（3-10ml/min，XK层析柱）

化学稳定性 所有常用的水溶性缓冲液中稳定，如：1M醋酸盐，pH7.4，6M 盐酸胍，室温，1h

pH稳定性 pH3-12

贮存温度 +4-30℃

贮存液 20%乙醇

* 水是室温的。

** 结合力与流速有关，低流速增加结合量，这在上样和洗脱过程中非常重要。蛋白性质，pH，温度也影响结合量。

试剂配制

缓冲液的配制：

用来配缓冲液的水及化学试剂纯度要求很高，建议试剂配好后，用0.45μm滤膜过滤。

结合液：PBS，pH7.3（140mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，pH7.3） 洗脱液：50mM Tris-HCl，10mM还原性谷胱甘肽，pH8.0）

注意：结合液和洗脱液中可以含有1-10mM DTT。

样品的准备：上样前，样品需离心或用滤膜过滤。