蛋白质凝胶电泳操作中应注意的几个问题

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钟蛋白质凝胶电泳操作中应注意的几个问题 内蒙古自治区赤峰市种子管理站 (2 0 0张学军 0 40 ) —————————一

蛋白质凝腔电泳是一项快速而又准确的生物技

4浓缩胶的高度：当分离腔 (层胺 )固后，着下凝接 便是灌浓缩腔。缩腔是上层的大孔腔，着防止对浓起

术，受仪器设备、员素质和药品配制等因素的影但人响，一实验室中做同一个样品往往会出现不同的同结果。了避免上述情况的发生，电泳时应注意以为在 下几个方面： l电压：个别植验人员认为，电压会使电泳时有低

流的作用。样品中蛋白质分于依照其大小顺序遥次在其与分离胶的界面积压成薄层 (在电场的作用即 下被浓缩成一条极窄的蓝色区带 )显示出浓缩效，

应。果浓缩腔灌得过少，失去了它防止对流的作如便 用，能很好地显示浓缩效应 f得过多则会占据下不灌

间延长，出舶电泳谱带会更清晰，者加大电压，做或 可减步电泳时间，两种认识都是不正确的。泳量这电适宜的电压是 5 0,于 5 0时，泳谱带明显 0V大 0V电

层分离腔的空间，得样品不能很好地进人分于筛使 分离，响分离效果。因此，影电辣时灌人浓缩腔的高度以 15m为最适宜。 .c

拉不开，在一起无法计算迁移率；于 50时，挤小 0V 从样品中提取出来的蛋白质因受热失去活力，致导 电泳谱带扩散，糊不清难以辨别。模

5倦化剂：化剂 (氯化氧 )浓度及用量，定催过的决 着凝腔凝固时间的长短和速度，对电泳有着很大这

2离子强度和 P值 t极缓冲液即电泳液的离于 H电 强度与电泳的分离效果有直接关系。离子强度与电泳液用量及电极铂金丝的表面积大小成正比。此，因

的影响。凝腔储备液中加人过量的催化剂，然可以虽使腔凝固速度加快 .往往会改变凝腔孔径的大小。但 由于胶凝得太快，会导致腔板凝周不均匀，还并且出

使用垂直板电泳糟检测种于纯度时，用 P 3 3需 H .的高离于电泳液

,为 P值舶大小直接影响电泳因 H的迁移速度。泳液的用量应是前糟设过胶面，糟电后 投过铂金丝，样即可形成一个电场。配制电泳液这在

现腔板太软，在玻璃板上取不下来 .者腔板发粘或脆，碰就断裂成碎片。催化剂加得过少时 .延长一会腔凝固的时间，加了胶与空气接触的机会 .凝胶增使孔径的大小难以控制，致分于筛失灵 .而影响迁导从移速度和效果。因此，要严格按照规定的比例 (温室低时可直接用原液 .温高时用 1的溶液 )人室 0加 循化剂。胶凝周的时间以在 5 l l m n之内为最 mn O i 佳

丑药品储备液时，用新制的蒸榴水，要使用无离要不 子水和放置时间过长的蒸馏水，为用这两种永做因出的电泳谱带会出现波浪状，带重叠和谱带模糊谱不清，以正确鉴定判别。难

3凝胶的浓度：腔系统的浓度往往取决于丙烯酰凝 胺和甲叉双丙烯酰胺加人的比例，同时这两种试剂也决定着凝腔孔径的大小。电泳过程中，白质分在蛋

6沮度：白质凝胶电泳一般在常温下即可进行，蛋

如果有条件，好在 1℃~ 1℃的环境中操作，最 0 5这样有利于保存样品中酶舶活性。的来讲，成电泳总造时升温的最主要舶因紊有两十一十是电压，一个另是电极缓冲灌的浓度。一般来说 .压和温度成正电比 .压越高，生的热量越多{电极缓冲液与温电产而度也成正比，极援冲液浓度越高，生的热量也越电产 大。因此，电泳操作过程中要严格按照规定的电压在和溶液浓度，这是蛋白质分离成致的关键。 收崭日期：9 8 0— 1 19— 3 8

于在电场作用下顺利地通过一个十孔径按照分于大小顺序依次排列，成迁移率。尤为重要的是，叉形甲双丙烯酰胺浓度的大小可改变凝腔系统“于筛分的性质，而影响迁移率，是个值得注意的问题。从这 因此，配制储备液时一定要按照规程中规定的比在 饼，则会因为随意改变药品舶比倒而影响电泳效否 果。

萎靖，粉过程完成.则要重新授粉。授

否 3 6对田间吐丝较晚的母本，人工剪苞叶 3 m .可 c

ld力争 7 o. d内授完，以取得最佳授粉效果。 3 8人工授粉前对田间母本要全面实行超前摸苞 .

7m以加快吐丝速度，短授粉时间。 c缩 3 7人工授粉的期限应根据花粉量大小 (穗来 .雄 源 )田间授粉情况强定，般应连续进行 7 和一 d~

带二三片叶去雄的办法，使花丝集中抽出，利授促以 粉的进行，止花丝抽出晚 .过授柑时机而减产肪错

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