实验(七) 脱氢酶活性测定
脱氢酶的正式命名应是AH:B氧化还原酶,它能酶促自一定的基质中脱出氢而进行氧化作用。脱氢酶广泛存在动植物组织和微生物细胞内。脱氢酶的种类因电子供给体和接受体的特异性而有不同。单位时间内脱氢酶活化氢的能力表现为它的酶活性。通过测定活性污泥或土壤中微生物的脱氢酶活性,可以了解微生物对污泥或土壤中有机物氧化分解能力,即污泥酶或土壤酶的活性。
利用已知受氢体能接受脱氢酶脱出的氢原子,如无色的氯化三苯基四氮唑(TTC,2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride),俗称红四唑,接受氢后变成红色的三苯基甲臜(TF,triphenyl formazan),根据产生红色的色度进行比色定量分析,以判断脱氢酶活性。
TTC作为受氢体,其还原过程可用下式表示。
H H N-N-C6H5 N-N-C6H5 - C6H5- +2e+C6H5 - +HCL + +2H N=N-C6H5 N=N-C6H5 CI
(无色TTC) (红色TF)
根据红色的深浅,测出相应的吸光值(A值),求出脱氢酶的活性。通常A值越大(红色深),脱氢酶活性越高。
1.1 材料与方法
(1)材料 活性污泥悬浮液或土壤悬浮液。
(2)方法 分光度法。
要点①所有操作应当尽量在避光条件下进行。脱氢酶最适反应条件,温度30~37℃,PH 值7.4~8.5。
②取用甲醛时要小心,不要碰到皮肤上,如若沾到皮肤上要迅速用自来水
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