沙枣根瘤中固氮放线菌物种多样性研究

放线菌

安徽农业科学，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｈｕｉＡ咖．Ｓｅｉ．２０１０。３８（１１）：５５３３－５５Ｍ．５５３６

责任编辑马树梅责任校对况玲玲

沙棘和沙枣根瘤中固氮放线菌物种多样性研究

刘志强，张利平＋

（河北大学生命科学学院，河北省微生物多样性研究与应用实验室，河北保定０７１００２）

摘要［目的］以沙棘和沙枣根瘤为研究对象，深入研究回氟放线茵物种的多样性。［方法］以通常用于分离弗兰克氏茵属（Ｆｒａｎｋｉａ）田

氮放线茵的无氮ＢＡＰ、Ｓ、ＪＡ、ＩＳＰ４、ＣＢ．Ｃｅｌ３、ＤＰＭ和ＦＴｗ等为固体和液体培养基，对采集自内蒙古通辽和赤峰的沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ）和沙枣（ｅｌａｅａｇｎｕｓ）植物根瘤进行放线菌的分离纯化，并依据１６ＳｒＤＮＡ序列测定结果对分离物进行系统发育分析。［结果］分离得到的８株放线茵分属于小单孢茵属（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）、链霉菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、野野村菌属（Ｎｏｎｏｍｌｌｌｏ，ｅｔｌ）和假诺卡茵属（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ），所有根瘤样品中均未分离到弗兰克氏菌属菌株；采用弗兰克氏茵属１６Ｓ一２３ＳｒＤＮＡ间隔区序列的特异性引物对所采集的沙棘和沙枣植物根瘤总ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，未出现特异性的１６Ｓ一２３ＳｒＤＮＡ间隔区序列务带。［结论］非豆科植物根瘤内固氮放线茵具有物神多样性，为今后固氯放线菌物种多样性研究提供借鉴。

‘

关键词根瘤；固氮放线茵；１６ＳｒＤＮＡ序列；１６Ｓ一２３Ｓ间隔序列；物种多样性

中图分类号Ｑ９４８

文献标识码Ａ文章编号０５１７—６６ｌｌ（２０１０）ｌｌ一０５５３３一舵Ｓｔｕｄｙ佃Ｓｐｅｃｉｅｓ

ＤｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＮｉｔｒｏｇｅｎ—ｆｉｘｉｎｇＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓｉｎｎ／ｐｅｏｐ妇ｅａｎｄＥ／ａｅａｇｎ脚ＲｏｏｔＮｏｄｕｌｅｓ

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ｓｅｑｕ锄ｃｅ；Ｓｐｅｃｉｅｓｄｉｖｅｒｓｉｔｙ．

固氮放线菌是能够在非豆科植物根部形成根瘤并进行ＩＳＰ４【６ｊ、ＣＢ．ＣｏＢ、ＤＰＭ、Ｆ１ｗ的固体和液体培养基中，同时用共生固氮作用的一类放线菌。据报道，目前世界上已有７目最后一次清洗样品的无菌水涂布相应培养基，检验消毒情

８科２５属２７９种木本双子叶植物与之共生结瘤同氮。我国况，于２８℃静置培养４—６周后，观察菌落生长状况，并挑取目前已查明共有８科８属８８个树种具有结瘤固氮作用，其单菌落进行纯化。

中有２０个树种为ＩＢＰ（国际生物学计划）未报道过的新纪录表１采自内蒙古自治区的样品

种‘１—２１。

Ｔａｂｌｅ１

Ｒｏｏｔ

ｎｏｄｕｌｅｓ

ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ

ｆｒｏｍＩｎｎｅｒ

ＭｏｎｇｏｌｉａＡｕｔｏｎｏｍｏｕｓＲ争

沙棘和沙枣作为重要的放线菌根植物已成为我国西北

ｇｉｏｎ

贫瘠地造林的先锋树种，对开垦造林、恢复植被和保护生态

采集地环境

环境等均有重要意义。另外，沙枣和沙棘还具有很高的经济采集地点

Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ

ｉｎ

ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ

ｓｉｔｅ

植物种类

价值。目前已报道的关于沙棘、沙枣内生固氮放线菌均为弗Ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇｓｉｔｅ

土质类型海拔高度．Ｐｌａｎｔ

ｓｐｅｃｉｅｓ

兰克氏菌，缺乏物种资源多样性。鉴于此，笔者以沙棘和沙

墅！１２Ｉ竖

型！堕生

通辽市红壤５３５

ｍ

沙棘枣植物根瘤为研究对象，深入研究固氮放线菌物种多样性，

赤峰市红山红壤５７６ｍ

沙枣，沙棘以期获得更多固氮活性高、抗逆性强、生长周期短的菌种，为

赤峰市南山红壤

５８９ｍ

沙棘今后固氮放线菌的研究及其在农业、林业等方面的应用提供

赤峰市元宝山

红壤４７８

ｍ

沙枣，沙棘

更加丰富的物种资源。１材料与方法

１．１材料供试材料为采自内蒙古自治区的沙枣和沙棘植物的根瘤样品（表１、图１）。１．２方法

１．２．１菌株的分离与纯化。先用自来水清洗样品数次，将

泥沙洗净；然后用７０％酒精和０．１％ｒｔｓｃｌ２各浸泡１０ｍｉｎ进行消毒；再用饱和碳酸钙溶液浸泡１０ｍｉｎ；最后用无菌水清

洗数次。研碎根瘤，将根瘤悬液加入无氮ＢＡＰ［引、ＳＬ引、ＪＡ‘“、

圈１采自内蒙的沙枣（Ａ）和沙棘（Ｂｌ植物的根瘤样品

ｌａｇ．１

ＲｏｏｔｎｏｄｕｌｅｓｏｆＥｌａｅａｇｎｕｓ

ＩＡ）ａｎｄｎｉｐｍｐｈａｅ（Ｂ）ｃｏｌ－

基金项目

国家基金资助“共生固氛放线茵分类系统的研究”项目ｌｅｔｔｅｄ

ｆｒｏｍ

Ｉｍ盯Ｍｏｎｇｏｆｉａ

ＡｕｔｏｎｏｍｏｕｓＲｅｇｉｏｎ

（３０７７０００３）；“河北省微生物资源基础信息库”项目（０９９６．７１１９Ｄ－１６）。

１．２．２

１６ＳｒＤＮＡ序列测定及系统发育树构建。对纯化后

作者简介刘志强（１９８３一）．男，河北唐山人，在读硕士，研究方向：固

的菌株分别进行菌体的培养与收集，提取ＤＮＡ模板¨１，ＰＣＲ

氮放线茵物种多样性研究。 通讯作者。

收稿日期２０１０－０２－２５

扩增１６Ｓ

ｒＤＮＡ序列。扩增所用引物序列如下：

万方数据