微生物菌种的保藏方法

微生物菌种的保藏方法

第３３卷第４期２０１０年４月Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．４Ａｐｒ．２０１０

微生物菌种的保藏方法

付美红，王耀耀,朱研研,郝慧云,刘云清,王亚莉

（华北制药集团新药研发中心，河北

[摘

石家庄

０５００１５）

要]菌种的保藏方法有很多，其原理主要是根据微生物的生理、生化特点，人为创造低温、干燥或缺氧条件，抑制微生物

的代谢作用，使其生命活动降至最低程度或处于休眠状态，使菌株很少发生突变，以达到保持纯种的目的。

[关键词]微生物菌种；保藏方法[中图分类号]Ｑ９３－３３６

[文献标识码]Ａ

[文章编号]１００３－５０９５（２０１０）

０４－００３３－０２

在发酵工业中，具有良好性状的生产菌种的获得

十分不容易，如何利用优良的微生物菌种保藏技术，使菌种经长期保藏后不但存活健在，而且保证高产突变株不改变表型和基因型，特别是不改变初级代谢产物和次级代谢产物生产的高产能力，即很少发生突变，这对于菌种极为重要。

微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素。所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这３个因素设计的。

1斜面低温保藏法

将菌种接种在适宜的斜面培养基上，当菌体长满斜面后，棉塞部分用油纸包扎好或把试管的棉塞换成无菌橡皮塞并用蜡烛封好后置于０～４℃的冰箱中保藏。但要注意菌种的保藏时间及温度因微生物的种类不同而不同，如霉菌、放线菌等保藏２～４个月需移种１次，细菌最好每月移种１次。此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单、使用方便、不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状，污染杂菌的机会亦较多［１］。2液体石蜡保藏法

此法亦称矿物油保藏法。先将化学纯石蜡油装于三角瓶中，塞上棉塞并用牛皮纸包裹，高压灭菌，然后将其置于恒温箱中，让水分蒸发至完全透明后备用。

[收稿日期]２０１０－０１－２２

[作者简介]付美红（１９８１－），女，助理工程师，主要从事微生

保藏工作。物菌种选育、

在无菌条件下，用吸管将石蜡油注入已长好的斜面试

管中，用量以高出斜面顶端１ｃｍ为宜，使菌种与空气隔绝，然后在棉塞外包上塑料纸或牛皮纸，将试管直立置于０～４℃的冰箱中保藏或低温干燥处保藏。保藏期间应定期检查，若培养基露出液面，应及时补充无菌石蜡油，使培养基始终处于液面下［２］。

此法实用且效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏两年以上不死，酵母菌可保藏１～２年，一般无芽孢细菌也可保藏１年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在３７℃温箱内亦可保藏３个月之久。此法的优点是制作简单、不需特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅［３］，应特别注意。3滤纸保藏法

将滤纸剪成小条，装入安瓿管中，塞以棉塞，１２１℃灭菌３０ｍｉｎ。将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使其充分生长。灭菌脱脂牛乳１～２ｍＬ滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽干。将棉花塞入管内，用火焰熔封，低温保存。

细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏两年左右，有些丝状真菌甚至可保藏１４～１７年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。

4沙土保藏法