微生物菌种的保藏方法

微生物菌种的保藏方法

·３４·河北化工第４期

取河沙过４０目筛去粗粒后，用１０％盐酸浸泡２～４ｈ以除去有机质，倒去酸水后用自来水冲洗至中性，烘干备用。另取非耕作层的不含腐殖质的瘦黄土或红土，用自来水浸泡使其呈中性，然后烘干、碾碎过１００目筛。将处理好的沙与土以（２～４）∶１的比例混匀，分装于小试管内，每管装１ｇ左右，塞上棉塞，用牛皮纸包好后高压灭菌。然后将培养成熟的优良菌种（一般指孢子层生长丰满的菌种）用无菌水洗，制成孢子悬液，每支沙土管用无菌吸管加入悬液０．５ｍＬ（一般以使沙土刚刚润湿为宜），塞好棉塞放入盛有干燥剂的真空干燥器内，用真空泵抽干水分。抽真空时间越短越好，以免孢子萌发。抽干的沙土管用无菌勺子捣松并每个种抽取１支回接于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长。若经检查没有问题，则将制备好的沙土管用石蜡封口放入冰箱或室内干燥处保藏［４］。

此法多用于能产生孢子的微生物，如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广、效果亦好，可保存两年左右，但应用于营养细胞效果不佳［５］。5液氮冷冻保藏法

先将菌种制成悬液备用，然后清洗安瓿瓶并烘干，再往安瓿瓶中注入冷冻保护剂。保护剂应根据被保藏微生物的类别选择，一般每瓶注入１０％～２０％的甘油０．８ｍＬ，塞上棉塞，高压灭菌，检查无菌后接入菌种，火焰熔封瓶口。将封好口的安瓿瓶放在冻结器内，冷冻速度以１ｍｉｎ下降１℃为好，使其冻结。然后将冻好的安瓿瓶立即放入液氮罐中保藏。恢复培养保藏的菌种需要用时，将安瓿管取出，立即放入３８±２℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。再打开安瓿瓶，将内容物移入适宜的培养基上培养。

此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物，如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。缺点是需要特殊设备。6冷冻干燥保藏法

将安瓿瓶用２％的盐酸浸泡１０～１２ｈ，用自来水冲洗干净后再用蒸馏水浸泡至ｐＨ值呈中性，干燥后

高压灭菌。将已生长好的菌体或孢子悬浮于灭菌的血清、卵白、脱脂奶及海藻糖等保护剂中制成浓菌液，将菌液无菌操作分装于准备好的安瓿瓶中。分装好的安瓿瓶放入低温冰箱中冷冻，然后将冷冻后的安瓿瓶置于冷冻干燥箱内，冷冻干燥８～２０ｈ后用真空泵抽真空，并在真空状态下熔封安瓿瓶，在－２０℃下保藏［６］。

此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，即使对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年。该方法保藏的微生物菌株有分发时不用事先开启，便于包装，降低在运输过程中泄漏的危险等优点，但操作复杂、设备昂贵。

7结语

除上述方法外，还有蒸馏水保藏法、生理盐水保藏法、自然基质保藏法等，以上各法可根据实验室具体条件与需要及菌种特性选用。菌种是一种重要的生物资源。菌种的保藏不仅有利于重现已经做过的实验，证实发现新的菌种，而且也是研究、推广、开发和

随着生物学技术的不断发实际应用科研成果的基础。

展，种质资源的利用对生命科学的研究起着越来越重要的作用，对菌种保藏技术也提出了越来越高的要求［７］。掌握先进的菌种保藏技术，为菌种的科学研究和工业生产提供有力的技术支持，正是菌种保藏的意义所在。

[参考文献]

［１］霍红．蜜环菌菌种保藏技术要点［Ｊ］．食用菌，２００３，（６）：４２．［２］吴建忠．食用菌母种保藏技术［Ｊ］．科学种养，２００８，（３）：２４．［３］李雁．微生物简易保藏方法及其应用［Ｊ］．湖北畜牧兽医，１９９８，（３）：２０－２２．

［４］黄日明．食用菌育种栽培加工技术［Ｍ］．湖南：湖南科学技术出版社，１９９８．

［５］吕线红，郭利美．工业微生物菌种的保藏方法［Ｊ］．山东轻工业学院学报，２００７，２１（１）：５２－５５．

［６］武治昌．食用菌菌种保藏技术［Ｊ］．农村科技开发，２００４，（８）：２９－３０．［７］蔡令仪，谭琦，曹晖，等．不同菌种保藏方法对香菇产量的影响［Ｊ］．食用菌学报，２００３，１０（１）：５２－５４．