大鼠精原细胞的分离纯化及鉴定

目的精原细胞在精子发生过程中起着重要作用,而精原细胞的分离纯化开展后续研究的基础。实验试图建立大鼠精原细胞的分离纯化方法寻找合适的培养条件。方法用组合酶消化出生9～10 d雄性SD大鼠睾丸组织,利用睾丸体细胞易于和塑料以及胶原介质结合的原理连续贴壁获得精原细胞。结果实验得出每只睾丸提取出的精原细胞数量为5×105个细胞。经碱性磷酸酯酶(BCIP/NBT)显色,阳性率〉90%

医学研究生学报 2 1 0 0年 6月第 2 3卷第 6期 JMe otr, o 3 N .I J dP s a V , u g l 2

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论

著

(基础研究 )

大鼠精原细胞的分离纯化及鉴定 袁劲涛，周源，晓冬韩 [摘要】目的精原细胞在精子发生过程中起着重要作用， 而精原细胞的分离纯化开展后续研究的基础。实验试图建 立大鼠精原细胞的分离纯化方法寻找合适的培养条件。方法 用组合酶消化出生 9—1 0 d雄性 s D大鼠睾丸组织，利用睾 实验得出每只睾丸提取出的精原细胞数量 丸体细胞易于和塑料以及胶原介质结合的原理连续贴壁获得精原细胞。结果

为 5×1细胞。经碱性磷酸酯酶( CP N T显色， 0个 B I/ B )阳性率> 0; 9%选用 c k做为表面标志对纯化的精原细胞进行流式细—i t 胞分析，阳性率为 8%,台盼蓝排斥试验检测出细胞的存活率>8%。结论 5用 5 合连续贴壁法获得较高纯度的精原细胞可基本满足雄性生殖医学方面的研究。 运用组合酶消化大鼠睾丸细胞悬液，并结

[关键词】生殖细胞；精原细胞；精子发生；胶原；睾丸；碱性磷酸酯酶

[中图分类号】 Q 7 2

【文献标志码】 A

[文章编号】 1 8 1 (00 0- 6 - 0 - 9 2 1)60 5 4 08 9 5 0

Ioain p r c t na d ie t ct no p r tg nai as slt, u i ai n ni ai fsemao o i rt o i f o d f o i n

YUAN Jn to HOU Yu n,HAN Xiod n i-a,Z a a—o g

( a oaoyo m nl ya dRpo uteBo g, dcl co l N n n n esy N ni 10 3,in— L brtr fI mu o g n erdci i oy Mei h o o aj g U i r t, aj g2 0 9 J g o v l aS f i v i n a s,hn ) u C ia

[ bt c] o j t e pra gn u n e a gns l s nm oato, n ufao e a gn e A s at be i Se t oi dr gpr t eeip y a prn re ad r ctn fpr t oiit r ev mo c i s m o s a i t l pi i os m o ash i b s

sf rfl w p r s ac .T e su y at mp s t s b ih t e me h d r i l t g h g l u e p p lt n f s e ma o o ilfo a i o l u e e r h oo h td t e t o e t l h t o sf s ai ih y p r o ua i so p r t g n a rm a s o o n o p may c l r so si c l r p r d fo 9 t 0 d y od S a sa d f d te r h u t r o d t n . M e h d T e p o e u e i r r ut e f e t e l p e a e rm -o 1 a—l D rt n n h g t l e c n i o s u t s s i i c u i to s h rc d r i b s d o ep n i l a siu a o t e l b n ih l lsi n ol g n marc s e u t r d i e u - n an n s a e n t r c pe t t e t l rs ma i c l id t t t p a t a d c l e t e h i h t c c s g yo c a i wh n c l e s r m o ti ig me u n c d u .w ee s s e mao o i o n tb n o p a t r c l g n w e u t r d i e l c n an n d u im h r a p r t g na d o i d t l si o ol e h n c l e n s n m— o t ii g me i m. c a u Re u t 5×1’c l sl s 0 el s

p rt s swee o ti e n ep re tg fva l el s 5 b r p n b u ti i g T e p r e tg fs e mao o il el x e e t r ban d a d t e c n a eo ib ec l wa % yT y a le san n . h c n a e o p r tg na l e - i h s 8 e c s

p e sn k t n CI/ T a k l e p o p aa e w r b u 5 r si g C— i a d B P NB l ai h s h ts e e a o t% a d 9 n 8 n 0% r s e t e y e p ci l . Co cu i n S e ma o o i e e ioa v n l so p r t g n a w r s l- td u ig t—t p e

z e sn wo se n ymai i e to t d g sin,f lo d b e o ig c n a nae o ai el y me n fplsi ihsc ae y Rati o— c olwe y rm vn o t mi td s m tc c lsb a so a t d s o td b ta lc l c

l g n I a d te i lt d s e mao o i a e u e o mae r p o u t e s i n e r s a c . a e , n h s ae p r tg n a c n b s d t l e rd c i c e c e e r h o v

[ e od G r e; p r a gnu S e a gns; ol e; et; la n h sh t K yw rs] em cl S e t oim; p r t eei C l gn T ss A kl ep ep a s l m o m o s a i i a

0引

言

精原细胞是睾丸中最幼稚的生殖细胞，中精其 基金项目：国家自然科学基金 ( 0 0 15,0 7 5 0高等学校博士 3 80 1 3 90 3 ); 学科点专项科研基金 (教师基金课题 )(0 82 4 0 6;新 2 00 8 10 )高等学校博士学科点专项科研基金 (博导类 ) ( 09 0 110 8) 20 0 9 10 4。

原干细胞 (p r tgna s m cl,S是未分化型 sema o i t e S C) o l e l

的精原细胞…,是精子发生的起点。精原细胞经有 丝分裂、数分裂、态演变，终形成精子。鉴于减形最精原细胞所具有的重要作用，其建立一套稳定的对分离、纯化以及原代培养的方法对于开展精原细胞 相关功能的研究具有重要意义。本试验试图建立

作者单位：10 3南京，京大学医学院免疫与生殖生物学实验室 209南[袁劲涛 (医学硕士研究生)、周源、韩晓冬]

通讯作者：晓冬，韩 E—ma:a x@ nu e u c i hnd j.d .n l