黄瓜茎基腐病菌拮抗真菌的分离和筛选

安徽农业科学，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｈｕｉＡｇｒｉ．Ｓｃｉ．２００８，３６（８）：３２６０－３２６１责任编辑金琼琼责任校对王淼

黄瓜茎基腐病菌拮抗真菌的分离和筛选

任爱芝１，赵培宝１，孔祥荣２

（１．聊城大学植物保护系，山东聊城２５２０５９；山东聊城２５２０００）２．山东省聊城市农业局，

摘要［目的］分离和筛选黄瓜茎基腐病菌的拮抗真菌。分离得到５种对瓜果腐霉、瓜类腐皮镰［方法］从病田土壤采集２１个土壤标本，

橘绿木霉、康氏木孢菌和立枯丝核菌有拮抗作用的拮抗菌，并进行温室盆栽防病试验。［结果］经鉴定，５种拮抗菌分属于长枝木霉、

霉、哈慈木霉和绿色木霉，对瓜果腐霉、瓜类腐皮镰孢菌和立枯丝核菌的生长都有强烈的抑制作用。在人工接种条件下，５种拮抗菌

对瓜果腐霉引起的茎基腐病的防治效果差些。对立枯丝核菌引起的茎基腐病的防效在６０％以上，［结论］该研究筛选出的５种拮抗菌

对瓜果腐霉、瓜类腐皮镰孢菌和立枯丝核菌引起的黄瓜茎基腐病均有一定的防效。关键词黄瓜茎基腐病；生物防治；木霉中图分类号Ｓ４３６．４２１．１文献标识码Ａ文章编号０５１７－６６１１（２００８）０８－０３２６０－０２ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃＦｕｎｇｉａｇａｉｎｓｔＰａｔｈｏｇｅｎＣａｕｓｉｎｇｔｈｅＢａｓａｌＳｔｅｍＲｏｔｏｆＣｕｃｕｍｂｅｒＲＥＮＡｉ!ｚｈｉｅｔａｌ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＬｉａｏｃｈｅｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ２５２０５９）Ａｂｓｔｒａｃｔ［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｈｅｐｕｒｐｏｓｅｏｆｔｈｅｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｉｓｏｌａｔｅａｎｄｓｃｒｅｅｎａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｆｕｎｇｉａｇａｉｎｓｔｐａｔｈｏｇｅｎｃａｕｓｉｎｇｔｈｅｂａｓａｌｓｔｅｍｒｏｔｏｆｃｕｃｕｍｂｅｒ．［Ｍｅｔｈｏｄ］Ｔｗｅｎｔｙ!ｏｎｅｓｏｉｌｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｄｆｉｅｌｄ．ＦｉｖｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｆｕｎｇｉｗｉｔｈａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎＰｙｔｈｉｕｍａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ，ＦｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉａｎｄＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｎｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｂｙｐｏｔｃｕｌｔｕｒｅｉｎｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．［Ｒｅｓｕｌｔ］Ｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ５ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｆｕｎｇｉｂｅｌｏｎｇｅｄｔｏＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ，Ｔ．Ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ，Ｔ．ｋｏｎｉｎｇｉｉ，Ｔ．ｈａｒｚｉａｎｕｍａｎｄＴ．ｖｉｒｉｄｅ，ａｎｄｈａｄｉｎｔｅｎｓｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｓｏｆＰ．ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ，Ｆ．ｓｏｌａｎｉａｎｄＲ．ｓｏｌａｎｉ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｍａｎｕａｌｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆ５ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｆｕｎｇｉｏｎｔｈｅｂａｓａｌｓｔｅｍｒｏｔｃａｕｓｅｄｂｙＲ．ｓｏｌａｎｉｗｅｒｅｏｖｅｒ６０％ａｎｄｔｈａｔｗｅｒｅｗｏｒｓｅｏｎｔｈｅｂａｓａｌｓｔｅｍｒｏｔｃａｕｓｅｄｂｙＰ．ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］ＦｉｖｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｆｕｎｇｉｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄｈａｄｓｏｍｅｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｂａｓａｌｓｔｅｍｒｏｔｏｆｃｕｃｕｍｂｅｒｃａｕｓｅｄｂｙＰ．ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ，Ｆ．ｓｏｌａｎｉａｎｄＲ．ｓｏｌａｎｉ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＢａｓａｌｓｔｅｍｒｏｔｏｆｃｕｃｕｍｂｅｒ；Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｔｒｏｌ；Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐｐ

黄瓜是山东省聊城地区设施栽培主栽蔬菜，因重茬连作，使土壤中病原菌逐年积累，再加上过量施用化肥农药，恶化了土壤微生态环境，导致土壤积水板结，茎基腐病的发生日趋严重。黄瓜茎基腐病属土传病害，在缺乏有效抗原的情况下，当前主要依靠药剂防治，成本高、防效一般，且易对环境造成污染，而利用拮抗菌对土传病害进行生物防治是一种重要的手段。为此，笔者从病田土壤中分离和筛选出５个真菌生防菌株，均为木霉属真菌，通过黄瓜茎基腐病菌拮抗试验和温室盆栽防病试验发现，防治效果明显。

１材料与方法

（Ｐｙｔｈｉｕｍａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）、１．１供试植物病原菌瓜果腐霉

瓜类腐皮镰孢菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉ）、立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ，均为从温室黄瓜病株上分离纯化、经接种培养得到ｓｏｌａｎｉ）

的病原菌。

１．２土壤标样采集和拮抗真菌的分离从不同设施类型地块分别取５点，每一取样点挖１０ｃｍ×１０ｃｍ×１５ｃｍ土壤，混合后取５００ｇ，晾干后粉碎，过１００目筛。每样本称取１ｇ，加灭菌水１００ｍｌ，剧烈振荡１０ｍｉｎ，取ｌｍｌ加入含有０．０１

摇匀，在２８～ｍｇ／ｍｌ链霉素的ＰＤＡ培养基中，３０℃下培养３～挑取不同类型的真菌菌落，纯化待测。５ｄ，

１．３拮抗菌的分类鉴定在经消毒的载玻片中央滴加１￣２滴ＰＤＡ培养基，然后加盖玻片，将分离得到的真菌菌株接到玻片边缘培养基上，置于消毒的培养皿内，２８～３０℃下培养，待菌丝长到盖玻片周围后，每隔１２ｈ在显微镜下观察再根据魏景菌丝、分生孢子梗及分生孢子的形态和颜色。

［１］

对峙法［３］，每一处理４个重复。不同拮抗菌对同一病原的拮抗作用的数据用Ｄｕｎｃａｎ′ｓ方法分析。

１．５室内防治效果测定将黄瓜种子在孢子浓度为１０７

个／ｍｌ的拮抗菌中浸泡３０ｍｉｎ，然ＣＫ和农药处理的泡清水，后播于装有无菌土的花盘中，淋２０ｍｌ／盘的拮抗菌孢子液，播种１５ｄ后，每隔１０ｄ接种病原ＣＫ和农药处理的淋清水，菌１次，共接２次。用病菌孢子悬浮液喷洒幼苗茎基部，接种量为２ｍｌ菌液／株，孢子浓度为１０７个／ｍｌ，接种后３ｄ，农药处理的用５０％腐霉利ＷＰ（日本住友化学株式会社）１０００倍液按２ｍｌ／株淋根，每处理重复４次，每重复１０株。第２次接种后５ｄ，每天观察植株发病情况，接种后１４ｄ，检查根茎部发病情况。

茎基腐病分级标准为：健株；茎基部或根部０级，１级，出现较小的病斑，大小约３ｍｍ×５ｍｍ；２级，１／３～１／２茎基部或根部坏死；病斑围绕主茎，根系大部分死亡；植３级，４级，株枯死。

２结果与分析

２．１拮抗真菌的筛选结果

２００５￣２００６年从聊城市东昌府区、

冠县等温室黄瓜、茄子、番茄、辣椒、西葫芦５种作物的地块

分离得到５个对供试采集土样及双孢蘑菇覆土共２１份，

的３种植物病原菌有拮抗作用的真菌菌株，经鉴定为长）、橘绿木霉（Ｔ．ｃｉｔｒｉｎｏｖｉｒｉｄｅ，、枝木霉（Ｔ．ｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ，Ｔ１Ｔ２）康氏木霉（Ｔ．ｋｏｎｉｎｇｉｉ，、哈慈木霉（Ｔ．ｈａｒｚｉａｎｕｍ，、绿色木Ｔ３）Ｔ４）霉（Ｔ．ｖｉｒｉｄｅ，。Ｔ５）

２．２拮抗菌对３种病原菌生长的抑制作用每一种类的拮

分别测定它对供试的３种病原菌生长的抑抗菌取１菌株，

制作用，结果见表１。由表１可知，５种拮抗菌对供试的病原菌都有强烈的抑菌作用。立枯丝核菌的抑菌Ｒ值为０．２７７０～培养２ｄ后，拮抗菌把病原菌包围，拮抗菌长０．５０７５，３ｄ后，

满整个培养皿，看不到病原菌丝；瓜类腐皮镰孢菌的抑菌Ｒ

超和文成敬等的分类方法进行分类鉴定［１－２］。１．４

拮抗作用测定

对植物病原菌拮抗作用的测定采用

基金项目聊城大学青年科研基金资助项目。

作者简介任爱芝（１９７０－），女，山东莘县人，硕士，副教授，从事保护

地蔬菜病害无公害防治技术研究。

收稿日期２００７!１１!２４