5种含丹参中成药微生物限度检查方法验证

目的建立5种含丹参中成药的微生物限度检查方法。方法通过接种阳性菌回收率试验测定冠脉宁片、清脑降压片、脑心通片、睡安胶囊、乙肝宁胶囊5种中成药是否含抑菌成分。结果脑心通片、清脑降压片2种供试品试验菌的回收率均为70%,证明无抑菌现象;冠脉宁片、睡安胶囊、乙肝宁胶囊有一定的抑菌作用,但可通过稀释法消除抑菌作用。结论脑心通片、清脑降压片应按常规方法进行微生物限度检

药物鉴定 用 09无菌氯化钠溶液制备成每 1 L含菌数为 5~10C U的 .% m 0 0 F 菌悬液。 2 4万法确定 .

21 00年第 l 9卷第 2期 3

2 4 1预试验 . .

2 2试验方法 .常规法为取 l 1供试液 1 L注皿。养基稀释法为取 1::0的 m培 l供试液 1 L注入 2个平皿 ( . L皿 )取 1 1 0的 m 05m/或：0的供试液 1 L注入 5个平皿 ( . m/ ) m 02 L皿。 23 .回收率试验

常规法：虑到丹参等

中药成分对金黄色葡萄球菌有一定的考抑制作用，选用金黄色葡萄球菌作为敏感菌株。果见表 1可故结。

见，心通片和清脑降压片对细菌无明显抑制作用，常规法测定脑用细菌数是可行的；脉宁片、安胶囊、冠睡乙肝宁胶囊对细菌的抑制 作用明显，可采用常规法测细菌数。不 表 1 5种中药金黄色葡萄球茵常规法预试验结果

试验组取样品 1, p 0g用 H为 7 0的无菌氯化钠一蛋白胨缓冲 .液稀释至 10m,成溶解均匀的 1 1 0 L使：0的供试液，别取各试验分菌5 0~10C U注入同一平皿中，即倾注琼脂培养基，凝固 0 F立待

后，规定温度下，菌培养 2 4,置细 4— 8h白色念珠菌和黑曲霉培养 4 7。液组取试验菌 5 8— 2h菌 0—10C U注入平皿中，即倾注琼 0 F立脂培养基，凝固后，规定温度下，菌培养 2 4,待置细 4~ 8h白色念珠

菌和黑曲霉培养 4—7, 8 2h测定所加入的试验菌数，行制备 2平个 平皿。试品对照组取样品 1, p供 0g用 H为 7 0的无菌氯化钠一 .蛋

白胨缓冲液稀释至 lo, 0 使成溶解均匀的 1 1 mL:0的供试液，即立倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度下，细菌培养 2 4, 4— 8白 h色念珠菌和黑曲霉培养 4 7,定供试品本底菌数。释剂对 8 2h测稀 照组取 p为 70的无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液 1 L和试验菌 H . m

培养基稀释法：用培养基稀释法 ( . L￣和 0 2m/m )采 0 5m/ I] . L 1 -

做进一步预试验。果见表 2可见，脉宁片、安胶囊、结。冠睡乙肝宁胶囊对细菌抑制作用明显，采用培养基稀释法( . L￣.测细菌数 O 5m/ 1 ) 不可行。培养基稀释法 ( ./l)进一步预试验，果见用 0 2mL l做 l 1结

5 0—10C U,别注入同一平皿中，察稀释剂对试验有无干扰， 0 F分考 该对照组各试验菌的回收率应不低于 7%。 0回收率=(验组平均试菌落数一供试品对照组平均菌落数 )菌液组平均菌落数 X10。/ % 0

表 2可见，养基稀释法 (./ )有效

消除 3种样品对金。培 O 2mL皿可黄色葡萄球菌的抑制作用，用培养基稀释法 (. m/l)细菌数 02 L I测 l 1 可行。

表 2 3种中药金黄色葡萄球菌培养基稀释法预试验结果

2 4 2验证试验 . .

压片对细菌无明显抑制作用，而冠脉宁片、睡安胶囊和乙肝宁胶囊 对细菌有明显抑制作用，中冠脉宁片的主药为丹参，睡安胶囊其而

对每个样品取 3批号，行 5次验证试验，个进细菌按培养基稀释

法 (. L I )加菌回收率试验，菌及酵母菌按常规法做加菌 O 2/l做 m l 1霉回收率试验。果见表 3可见，心通片和清脑降压片采用常规法结。脑 试验，冠脉宁片、安胶囊和乙肝宁胶囊以培养基稀释法 (. L皿 )睡 02/ m

和乙肝宁胶囊中丹参的量也较大，这提示丹参有抑菌作用，还可能 与其他中药有抵消或加强作用。如冠脉宁片中含有冰片，冰片作而用类似樟脑，止痛防腐作用；体外 (板混合法 )较高浓度有在平， (.% )葡萄球菌、球菌、炎双球茵、肠杆菌及部分致病性 05对链肺大皮肤真菌等有抑制作用。安胶囊中含有远志，远志乙醇浸液在睡而

进行细菌数测定验证，回收率均符合药典规定，法可行。方 表3 3 批样品回收率试验结果

品名

批 i号

r

而

伤人 体外对革兰阳性菌及痢疾杆菌、寒杆菌、型结核杆菌均有明显

抑制作用。乙肝宁胶囊含有白花蛇舌草，而白花蛇舌草体外抗菌作 用不显著，浓度煎剂对绿脓杆菌、寒杆菌、高伤金黄色葡萄球菌、变形杆菌、疾杆菌、痢流感杆菌、炎球菌、血性链球菌、瑟球菌肺溶奈 有抑制作用。 中药制剂的微生物限度检查通常按常规的药品微生物限度检

验方法进行细菌和霉菌的计数。由于中成药具有多种成分，中但其任何成分具有抑菌作用均可影响微生物限度检查的准确性。试本验以 20 0 5年版《国药典 (部 )微生物限度检查方法验证作为中一》依据，阳性对照菌的回收率作为评价方法的客观标准，定了上将确 述 5种中成药微生物限度检查的方法。 参考文献： [】国家药典委员会 .

中华人民共和国药典 ( 1一部 )M】京：学工业出【 .北化 版社 .0 5 20.

f】吉兰，云亭，海英， .丹参的体外抑茵作用研究 f】 2孙常宋等 J .时珍国医

3讨论

国药，0 3 1 (2:7 . 2 0,4 1 ) 2 6

文献【】示丹参有抑菌作用，试验表明脑心通片和清脑降 2提但

(稿日期：0 9— 2—1:回日期：0 0— 4— 9收 20 1 4修 21 0 1 )

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