一种新型、快速的吡嗪酰胺药敏试验新方法——吡嗪酰胺水解酶分析法

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医学研究通讯 2 2第3卷第9 0年 0 l期

技市 新

一

种新型、快速的吡嗪酰胺药敏试验新方法吡嗪酰胺水解酶分析法 ——

北京解放军 39医院 (00 1 0 10 9 )裴 由于世界范围内 AD IS的流行和大量流动人口

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荣匡铁吉

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果，以明确吡嗪酰胺水解酶分析法在吡嗪酰胺快速

的迁移，结核病在全球范围内的发病率大大回升，

敏感试验方面的应用价值，现报告结果如下。 材料和方法

耐多药结核病逐年增多并广泛传播，给公众健康带 来极大危胁，世界防痨工作也面临极大挑战。目前对抗耐多药结核病的手段有：开发研制新的抗痨药物，研制及时准确的药物敏感试验方法，推行 DT O S疗法等等。全球绝大多数国家都在开展结核分枝杆菌敏感试验，为临床用药提供依据。但其中重要的一线抗痨药吡嗪酰胺的敏感试验一直是实验室的一个难题和焦点…。因为吡嗪酰胺只在 p H为 5 5的环境中才呈现最大抗菌活性，而结核分枝杆 .

1痰标本：本研究受试痰标本 10例，大多留 . 2自本院结核科住院涂阳肺结核患者，部分留自院外涂阳肺结核患者。按常规采用我室准备的干净玻璃 瓶留晨痰，痰量 5~1m,当天不做实验的痰标本 0l

置4℃冰箱保存。 2结核杆菌临床分离株：4 . o株结核菌临床分离物来自本实验室保存的于 19 99年 2月~1 9 4 9年 9 月从住院肺结核病人痰标本中分离并做过菌型鉴定的结核杆菌分离株。

菌在酸性条件下生长很差，导致药敏结果不稳定， 甚至无结果。 J我院匡铁吉教授在 8代研制的匡氏琼脂培 0年养基及琼脂培养敏感试验法，可进行各种抗结核药物的敏感试验，可靠性及重复性可达 9%,平均 3 9 周报告结果，且不需 c 2箱，结核菌生长良好， 0孵 在临床上得到广泛应用和好评。用于吡嗪酰胺敏感 试验，分枝杆菌在酸性匡氏培基上较酸罗氏培基上

3匡氏琼脂培养基及匡氏液体培养基的制备： . 分别制作匡氏琼脂培养基 ( T ) D 1,含 P A匡氏酸性 Z 琼脂培养基 ( 1,不含 P A匡氏酸性琼脂培养基 Z) Z

(o Z )及酸性匡氏液体培养基 ( _) WD。 4匡

氏琼脂培基法吡嗪酰胺直接药敏试验：痰 .标本用 2氢氧化钠液化，除杂菌 2% 0分钟，取

011 .m分别接种与 z l和 Z o斜面上，置 3℃温箱内 5 培养，每周观察，根据 Z、Z l 0生长情况判定结果， 至 4周。

生长迅速，同样 3周内可报告结果，且结果可靠。 吡嗪酰胺水解酶分析法是 WA N Y E在 7年代根据吡 0

嗪酰胺的作用机理，即敏感的结核分枝杆菌具有吡 嗪酰胺水解酶活力，可将吡嗪酰胺转化为杀菌的吡

5匡氏琼脂培基法吡嗪酰胺间接敏感试验：4 . o 株临床结核菌复活后，用无菌生理盐水稀释成

嗪酸，而硫酸亚铁铵可与吡嗪酰胺水解酶发生显色反应这一原理创立的，它克服了分枝杆菌在酸性培基上生长缓慢及生长较差这一缺点，可靠性达 9% 8 以上，平均报告结果时间为 2周左右，更为简便、

1r,m菌悬液，各取 0 1 0,/ L e .分别接种于 z和 Z l o上， 观察结果同上。

6酸罗氏法吡嗪酰胺敏感试验：酸罗氏法对照 . 和含吡嗪酰胺培基的制备及有关操作，详见早先报 道。

快速。本研究应用匡氏基础固体培养及匡氏液体培养进行吡嗪酰胺水解酶分析，并以匡氏琼脂培基法的吡嗪酰胺药敏试验结果作为标准，并同时做了酸罗氏法的吡嗪酰胺药敏试验，对比它们之间的效

7吡嗪酰胺水解酶分析法：从所培养的结核菌 .

分离斜面上刮取约 1m 0 g湿菌，接种于 4 lZ mP0试管 中，3℃培养 3天后取出，加入 l 5%新鲜配置的硫

酸亚铁铵 l l m,置于 4℃冰箱内冷藏 4小时后观察结 1山西省职工医学院 .

果，出现粉红色 (各种程度 )则为阳性，指示为敏

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