新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程

新城疫冻干疫苗生产工艺流程

1 生产用毒种制备

1.1 毒种繁殖 将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。选接种后72~120小时死亡、且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。将检验无菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分装于安瓿中,冷冻保存。注明收获日期,毒种代数等。 1.2 毒种鉴定

1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度 的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获 鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥108EID50。

1.2.2 纯净 应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒检验标准操作规程》进行。 1.3 毒种保存 在-15℃以下保存,应不超过1年。 1.4 毒种继代 应不超过3代。

2 制苗材料选择 选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。 3 制苗用毒液的制备

3.1接种 取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36~37℃继续孵育，不必翻蛋。

3.2 孵育和观察 鸡胚接种后,每日照蛋一次，将在60小时前死亡的鸡胚弃去。60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。

3.3 收获 将冷却4~24小时的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部卵壳，剪开尿囊膜，吸鸡胚液,每若干个鸡胚的胚液混合为一组。收获后的胚液置于灭菌瓶中，作好标识，留样后，结冻保存。

在收获胚液的同时, 应逐个检查鸡胚, 如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用。

4 半成品检验