食品中黄曲霉毒素B1的测定

实验六 食品中黄曲霉毒素B1的测定

一、实验目的与要求

学习薄层层析法测定粮食中黄曲霉毒素B1原理及步骤。

二、实验原理

样品中AFT B1经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层色谱分离后，在波长365nm紫外光下产生荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准品AFT B1最低检出量产生的荧光强度比较来测定样品中AFT B1的含量。

三、实验仪器与试剂

仪器：玻璃板：5×20cm；涂布器；色谱展开槽（25×6×4cm）；紫外光灯：100-125W，带有波长365nm滤光片；微量注射器：20uL,10uL各一支

试剂：三氯甲烷（AR）；正己烷（AR 沸程30-60）或石油醚（沸程60-90）；甲醇（AR）；苯 （AR）；乙腈（AR）；无水乙醚（AR）；丙酮（AR）。（以上试剂应重蒸，并应经检验对薄层色谱测定无干扰）

苯-乙腈(98:2)混合溶液；甲醇-水（55:45）混合溶液；三氟乙酸（AR）；氯化钠（AR）；无水硫酸钠（AR）；硅胶G（薄层色谱用）。

5%次氯酸钠溶液：称取100g漂白精，加入500mL水，搅匀。另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3.10H2O）溶于500mL温水中，倒入上述溶液中，搅匀，澄清过滤后贮存于带橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒剂。

黄曲霉毒素B1标准贮备液：用百万分之一的微量分析天平精密称取

1-1.2mgAFT B1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光置于4℃冰箱中保存。使用前用紫外分光光度计测定其浓度，再用苯-乙腈混合溶液调整其浓度为10ug/mL。（在350nm测定AFT B1的苯-乙腈溶液的吸光度，其摩尔消光系数为19800，可根据朗伯-比尔定律求出其浓度）。

黄曲霉毒素B1标准应用液I（1ug/mL）：吸取1.0mL10ug/mL的黄曲霉毒素B1标准贮备液于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。

黄曲霉毒素B1标准应用液II（0.2ug/mL）：吸取1.0mL 1ug/mL的黄曲霉毒素B1标准应用液I于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。

黄曲霉毒素B1标准应用液III(0.04ug/mL)：吸取1.0mL 0.2ug/mL的黄曲霉毒素B1标准应用液II于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容。

四、操作步骤

1．样品预处理

称取4g混匀的花生油样品于小烧杯中，用20mL石油醚或正己烷，将其转移到125mL分液漏斗中，用20mL甲醇-水溶液分数次洗烧杯，洗液并入分液漏斗中，振摇2分钟，静止分层后，将下层甲醇-水溶液移入第二分液漏斗，再用5mL甲醇-水溶液重复提取一次，提取液并入第二分液漏斗中。在第二分液漏斗中加入20mL三氯甲烷，振摇2分钟，静止分层后，放出三氯甲烷层，经盛有约10g先用三氯甲烷湿润的无水硫酸钠的慢速滤纸过滤于50mL蒸发皿中，分液漏斗中再加5mL三氯甲烷提取一次，三氯甲烷层一并滤入蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并入蒸发皿中。在通风柜中，将蒸发皿于65℃水浴上