实验一 比色法测定大黄中有效成分的总量
学时分配:6学时
实验目的和要求
1.掌握羧基蒽醌苷类及游离羧基蒽醌的性质;
2.通过本次实验了解大黄类药材中有效成分的含量测定方法。
实验原理
有色物质的溶液对不同波长的入射光线有不同程度的吸收,这是物质的性质。溶液颜色的深浅往往是溶液浓度高低的标志,而颜色的深浅与对一定波长的吸收度有关。因此,可以通过比较溶液对被吸收光的吸收度来测定溶液中物质的含量。 实验条件
1.仪器:分光光度计,移液管,容量瓶,锥形瓶,量筒。
2.试剂:NaHCO3, 10%FeCl3, 浓盐酸,氯仿,0.5% 醋酸镁甲醇溶液。 实验内容
1.对照品溶液及标准曲线:精密称取1,8 – 二羟基蒽醌2.5 mg 于25 ml 容量瓶中,加氯仿溶解并加至刻度,精密吸取对照品溶液0.5,1,2,3,4 ml ,分别置于25 ml 容量瓶中,蒸去氯仿,加0.5% 醋酸镁甲醇溶液至刻度,摇匀。以甲醇为空白,在515 nm 处测定,以吸收度为纵坐标,浓度(μg / ml)为横坐标,绘制标准曲线。
2.定量分析
精密称取药材粉0.1 g ,置100 ml 烧瓶中,精密加入水25 ml ,称定重量。直火加热15 分钟,放冷,称定重量,用水补足至原重量,加碳酸氢钠50 mg ,摇匀,静置后用干燥滤纸滤过,弃去初滤液,精密吸取续滤液10 ml ,置100 ml 具塞烧瓶中,加10%FeCl3 溶液20 ml ,回流20 分钟,加HCl 1ml ,继续回流30 分钟,放冷,加入氯仿25 ml ,盖好瓶盖,用力振摇,转移至125 ml 分液漏斗中,使分层,分取氯仿层,再用20 ml 氯仿(洗涤烧瓶后)萃取一次,分取氯仿层与上次合并,并用水洗涤二次,每次用水15 ml ,将氯仿层用干燥滤纸滤过于50 ml 容量瓶中,用氯仿洗涤滤纸,洗液合并于容量瓶中,用氯仿稀释至刻度,摇匀。精密吸取5 ml 氯仿提取液,置25 ml 具塞烧瓶中,蒸去氯仿,
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