当前位置： 文档下载 > 所有分类 > 自然科学 > 生物学 > 蛋白羰基化和脂质过氧化的测定蛋白羰基化测定和脂质过氧化的测定方法,实验方法,和结果分析。
实验单元3：蛋白羰基化和脂质过氧化的测定
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摘要：蛋白羰基化和脂质过氧化指标可以反映鱼类的氧化损伤水平。本实验对鲫鱼在应激条件下蛋白羰基化水平和脂质过氧化指标进行了测定，以探讨应激对鲫鱼氧化损伤的影响。实验结果表明，鲫鱼在应激条件下，其羰基浓度为38.255nmol/L，而它的MDA浓度为20.70nmol/mL.这两组指标都显著大于鲫鱼的正常值。说明应激能够引起鲫鱼的氧化损伤。
关键词：蛋白质羰基化 脂质过氧化 鲫鱼
【前言】
MDA含量的测定原理：丙二醛（MDA）是膜脂过氧化（LPO）最重要的产物之一。脂质过氧化物水平是测定MDA的降解产物含量。MDA能与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，在532nm处有最大吸收。
蛋白羰基化的测定原理：蛋白质侧链氨基酸被氧化修饰后，羰基产物积累，蛋白质功能丧失甚至被降解。蛋白质羰基含量是蛋白质氧化损伤的敏感指标。羰基可以2,4-二硝基苯肼（DNPH）反应生成红棕色沉淀2,4-二硝基苯腙，将沉淀用盐酸胍溶解后即可读取370nm下的吸光度值，从而测定蛋白质的羰基含量。
【材料与方法】
1.1实验用鱼 体重为200g左右的鲫鱼
1.2实验仪器与试剂
实验仪器：涡旋振荡器、计时器、高速冷冻离心机、水浴锅、冰箱、酶标仪、制冰机
实验试剂：PBS、10mmol/l的DNPH(4℃，避光保存)，2.5mol/l的HCl，三氯乙酸、无水乙醇、乙酸乙酯、6mol/L盐酸胍、10mM BHT（丁基羟基甲苯）、20%醋酸、1%SDS、TBA（硫代巴比妥酸）、10nM MDA标准品
1.3试验方法：
1.3.1蛋白质羰基化的测定
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