当前位置： 文档下载 > 所有分类 > 医药卫生 > 原代细胞培养操作原代细胞培养操作
取材：
1． 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。
2． 把整个孕鼠浸入盛有75％乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出
后放在大平皿中携入超净台。
3． 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌
镊子将皮肤扯向后腿。
4． 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子
宫，置于无菌的培养皿上。
5． 剔除胚胎周围的包膜（若胚胎较大，应剪去头、爪），将胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。用平衡盐溶液漂洗胚胎至清洗液清亮。
切割（2人一组）：
6． 将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中，用平衡盐溶液漂洗。
7． 然后用眼科手术剪刀小心地反复剪切胚胎，直到成1mm3左右的小块，再用平衡盐溶液清洗组织块至清洗液清亮。
8． 静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。 消化、接种培养（2人一组）：
9． 视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液（约3ml），37℃
中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次。
10． 静置，吸去上清，加2ml织块，使细胞分离，静置，使未分散的组织块下沉。
11． 3ml）的培养
瓶中（若计数，按每细胞瓶1x 106细胞的数量接种），置于37℃，二氧化碳培养箱中培养。培养3～5天观察结果。
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