普那菊苣高效再生体系建立和遗传转化研究

分子植物育种，２００６年，第４卷，第４期，第５６５－５７０页ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，２００６，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．４，５６５－５７０

研究报告

ＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｐｏｒｔ

普那菊苣高效再生体系建立和遗传转化研究

宋书锋１曹凤２杨培志３陈明利２李传山２郭蔼光１，２＊

１西北农林科技大学生命科学学院，杨凌，７１２１００；２陕西省农业分子生物学重点实验室，杨凌，７１２１００；３西北农林科技大学动物科技学院，杨凌，７１２１００

＊通讯作者，ｇｕｏａｉｇｕａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ

摘要普那菊苣为菊科多年生草本植物，从国外引种后已在我国得到广泛种植。普那菊苣草质柔嫩，适口

性优良，营养丰富，牛、羊、猪、鱼、兔极喜食，是一种非常优良的牧草，具有广阔的发展前景。本研究通过对不同激素浓度配比实验，建立普那菊苣的高频再生体系，结果表明ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ培养基可高效诱导愈伤组织和芽的分化，１／２ＭＳ培养基可快速诱导根的生成，形成再生植株。通过构建植物表达载体ｐＢＩ１２１－ＧＦＰ，利用农杆菌介导转化普那菊苣以探寻高效的普那菊苣转化体系，结果显示以农杆菌ＬＢＡ４４０４为介导菌株、以叶片为转化受体、３ｄ预培养时间和３ｄ共培养时间以及３５０ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素和４０ｍｇ／Ｌ卡那霉素筛选浓度转化效果较好，为利用普那菊苣生产动物口服型疫苗建立了初步的技术基础。

关键词

普那菊苣（ＣｉｃｈｏｒｉｕｍＩｎｔｙｂｕｓＬ．），组织培养，根癌农杆菌

ＨｉｇｈＥｆｆｉｃｉｅｎｔＳｙｓｔｅｍＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｎＰｌａｎｔＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄＳｔｕｄｙｏｎＧｅｎｅｔｉｃｓＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎＰｕｎａＣｈｉｃｏｒｙ（ＣｉｃｈｏｒｉｕｍＩｎｔｙｂｕｓＬ．）

ＳｏｎｇＳｈｕｆｅｎｇ１ＣａｏＦｅｎｇ２ＹａｎｇＰｅｉｚｈｉ３ＣｈｅｎＭｉｎｇｌｉ２ＬｉＣｈｕａｎｓｈａｎ２ＧｕｏＡｉｇｕａｎｇ１，２＊

１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，７１２１００；２ＳｈａａｎｘｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，７１２１００；３ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，７１２１００；＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｇｕｏａｉｇｕａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ

ＡｂｓｔｒａｃｔＰｕｎａＣｈｉｃｏｒｙ（ＣｉｃｈｏｒｉｕｍＩｎｔｙｂｕｓＬ．），ａｐｅｒｅｎｎｉａｌｈｅｒｂａｃｅｏｕｓｐｌａｎｔｏｆＣｏｍｐｏｓｉｔａｅｆａｍｉｌｙ，ｉｓｗｉｄｅｌｙｐｌａｎｔｅｄａｔｏｕｒｃｏｕｎｔｒｙａｆｔｅｒｉｎｔｒｕｄｕｃｔｉｏｎ．ＰｕｎａＣｈｉｃｏｒｙｉｓｔｅｎｄｅｒａｎｄｄａｉｎｔｙ．Ｉｔｉｓｒｉｃｈｏｆｎｏｕｒｉｓｈｍｅｎｔ．Ｃａｔｔｌｅｓ，ｓｈｅｅｐ，ｐｉｇｓ，ｆｉｓｈａｎｄｒａｂｂｉｔｓｐｒｅｆｅｒｉｔ．ＰｕｎａＣｈｉｃｏｒｙｉｓａｋｉｎｄｏｆｐａｓｔｕｒｅｔｈａｔｈａｓａｐｒｏｍｏｔｉｏｎａｌｖａｌｕｅ．Ｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｄｉｓｃｕｓｓｅｄｈｏｗｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｈｉｇｈ－ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｆＰｕｎａＣｈｉｃｏｒｙｂｙｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅｃｏｍ－ｂｉｎａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｅｄｉｕｍｏｆＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌｃｏｕｌｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙｉｎ－ｄｕｃｅｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｃａｌｌｕｓａｎｄｂｕｄｏｆｌｅａｆ，ｔｈｅｍｅｄｉｕｍｏｆ１／２ＭＳｉｎｄｕｃｅｄｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｒｏｏｔｓｑｕｉｃｋｌｙ，ａｎｄｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｐｌａｎｔｆｏｒｍｅｄ．ＶｅｃｔｏｒｐＢＩ１２１－ＧＦＰｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｔｏＰｕｎａＣｈｉｃｏｒｙｂｙＡ－ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ．Ｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｌａｎｔｓｃｏｕｌｄｂｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｐｒｅ－ｃｕｌｔｕｒｉｎｇｆｏｒ３ｄ，ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｉｎｇｗｉｔｈＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＬＢＡ４４０４ｆｏｒ３ｄ，ｔｈｅｎｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇｔｏｔｈｅｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔｍｅｄｉａｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ３５０ｍｇ／ＬＣａｒｂａｎｄ４０ｍｇ／ＬＫａｎｆｏｒ２０ｄ．Ｔｈｉｓｓｙｓｔｅｍｉｓｔｈｅｅｌｅｍｅｎｔａｒｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｍａｍｍａｌｅｄｉ－ｂｌｅｖａｃｃｉｎｅ．

ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｕｎａＣｈｉｃｏｒｙ，Ｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ，Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ自１９８３年获得转基因植物以来，人们已经利用植物反应器生产出了糖类、蛋白质和脂类（杨蓉和朱睦元，２００２）。近年来在疫苗方面，最激动人心的研究工作是利用植物生物反应器生产口服型疫苗（汪仁莉

和吕玉玲，２００２）。Ｗｉｇｄｏｒｏｖｉｔｚ等（１９９９）用转基因苜

蓿表达了ＦＭＤＶ结构蛋白ｖｐ１，用此转基因苜蓿的新鲜叶片喂饲小鼠，小鼠体内产生了特异性抗体。Ｇｏｍｅｚ等（２０００）则利用马铃薯表达了来自猪传染性