木本植物蛋白提取和SDS_PAGE分析方法的比较和优化

谷瑞升等, 木本植物蛋白提取和SDS-PAGE分析方法的比较和优化. 植物学通报, 1999. 16(2).

植物学通报 1999,16(2):171~177

ChineseBulletinofBotany

木本植物蛋白提取和SDS PAGE分析

方法的比较和优化

1谷瑞升

1

22刘群录 2陈雪梅 2蒋湘宁 (中国科学院植物研究所 北京 100093)(北京林业大学森林生物实验中心 北京 100083)

摘要 在几种木本植物上对4种常用蛋白提取方法、4种凝胶染色和脱色方法及影响蛋白定量和SDS PAGE电泳的因素进行了比较研究,发现:利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少,得到的电泳结果,蛋白条带清晰,数量多;将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为甲醇可大大改善染色和脱色效果,获得了没有背景或背景很浅的电泳结果。通过研究确定了一套优化的适用于木本植物的蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色、脱色以及干胶制备的方法。利用这一优化方法对胡杨细胞盐胁迫蛋白进行了研究,发现了与高水平盐胁迫有关的66kD蛋白和与盐胁迫和干旱胁迫均有关的28kD蛋白,获得了满意的蛋白SDS PAGE分析结果。

关键词 木本植物,蛋白提取,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳

COMPARISONANDOPTIMIZATIONOFTHEMETHODS

ONPROTEINEXTRACTIONANDSDS

PAGEINWOODYPLANTS

1GURui Sheng 2LIUQun Lu 2CHENXue Mei 2JIANGXiang Ning

1

2((InstituteofBotany,TheChineseAcademyofSciences,Beijing100093)ExperimentalCenterofForestBiology,BeijingForestUniversity,Beijing100083)

Abstract ThemethodsofproteinextractionandSDS PAGEwerecomparedandoptimizedinwoodyplants.Theimprovedstepsincludedmodifiedproteinextraction,substitutionofethanolformethanolinthesolutionofstaininganddestaining.Satisfiedresultswereachievedintheapplicationoftheoptimizedmethodtotheproteinanalysisofseveralwoodyplants.66kDproteinbandrelatedtosaltstressand28kDproteinbandassociatedwithosmoticstresswereobviouslyshowedoutintheanaly sisforthesuspensivlyculturedcellsstressedwithNaClofPopuluseuphratica.

Keywords Woodyplants,Proteinextraction,SDS PAGE

SDS PAGE(十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳)是分析生物体蛋白质常用的方法,其技术多采用Laemmli(1970)分析细菌蛋白的方法。由于木本植物组织中的色素、酚、醌等次生代谢物质较细菌和草本植物中的多,因而SDS PAGE分析受到了很大的干扰,加之蛋白提取、定量以及凝胶染色、脱色方法多种多样,造成电泳结果不稳定和蛋白电泳谱 国家教委优秀青年教师基金资助课题。