当前位置： 文档下载 > 所有分类 > 医药卫生 > 绣球菌子实体多糖的分离与纯化绣球菌子实体多糖分离与纯化
一、材料
菌株：绣球菌子实体
二、方法与步骤
1、预处理
粉碎：取200体绣球菌子实体洗净、阴凉处晾干，机械粉碎。
2、提取粗多糖
取200g绣球菌子实体粉末与2000ml水中浸泡24h。
将浸泡后的液体置电磁炉上煮往锅内增添水，使加水量大约为6000ml。煮一定时间后，将液体滤出。于旋转蒸发仪中浓缩至适当体积,加入2倍体积的95%的乙醇,醇沉24h,用离心机3000 r/min的转速离心10min,弃去上清液,所得沉淀放入培养皿中于50~60℃电热真空干燥箱中烘干,得粗多糖并分别称取粗多糖质量。
3、葡聚糖含量测定
试剂：
（1）浓硫酸：分析纯，95.5%
（2）80%苯酚：80g苯酚（分析纯重蒸馏试剂）溶于20ml水，冰箱中避光长期储存。
（3）6%苯酚：以80%苯酚配制。（现配现用）
（4）分析纯葡萄糖。
操作
（1）制作标准曲线：准确称取葡萄20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，沸水中加热20分钟，取出冷却至室温。于490nm测光密度值。以2.0ml水按同样显色操作为空白，质量浓度为横坐标，A为纵坐标，得标准曲线。 回归方程：A=0.0113C+0.015（r=0.9987）线性范围在10-70微克
(2)样品含量测定：
精密称取粗多糖10mg，置100ml 量瓶中，蒸馏水定容，质量浓度为0.1mg/ml。吸取样品溶液1ml（5份），分别置于20ml试管中，加入蒸馏水使其最终体积为2ml，各管加入6%苯酚1ml，混匀，迅速加入浓硫酸5ml，摇匀，静置5min后，放入沸水中加热20min，取出后冷却置室温，在490nm处测定吸光度。以标准曲线计算多糖含量。
4、脱蛋白（Sevag 法）
样品溶液：Sevag试剂=5:1
Sevag试剂的配制 三氯甲烷：正丁醇=5:1
充分振荡1－2h，静止，离心，取上清重复，至无游离蛋白为止。
5、透析
剪取适当长度的截留分子量8000的透析袋，用透析袋夹子夹住一端，灌入除蛋白后多糖
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