运用ELISA检测_瘦肉精_的技术要点

福建畜牧兽医

第

卷 2第

期

2

4

2年

6

0

运用 中圈分类号 :

E +

L

I检测 黄志坚 :

“

S肉精瘦 4) 1 一

”

的技术要点 5 36 000 1 42 一

三明市畜牧兽医站 :

1

.

4 8 5

57

文献标识码

B

文章编号

l (3

一

《

4

2

一

)

0 ,

3

33

00

0

00 0

0

高效液相色谱 ( H ( ,

LC和气 )相色谱

一

C

G克伦特法 )曾作为检测盐酸 S罗的M常用方 ,

—

质谱

轴为 P百分吸光度值 kg

Y

轴为盐酸克伦特罗浓度 g n 200一 2 00 0

/

)的自然对数

。

标准曲线在 。。

吃人g ,

法但由于检测费用昂贵步骤繁琐现已不适用于

,

范围内应当是线性

相对应每一个样品的浓度可以

畜牧兽医部门的检测 ,

。

竞争酶标免疫法 ( E I L ,

S A ”

)运 ,

从标准曲线上查出

也可以求出回归曲线的方程 。

用抗原抗体反应的原理能快速地对瘦肉精作出

“

计算未知样品中盐酸克伦特罗浓度

定量分析一般实验只需 、

2一 3h

,

适用于宰前检测 ,

而且实验具有准确性高重复性强的优点检测费用

也相对低廉 1

。

现将该方法介绍如下

。

试剂和设备 t i叩 h德国拜发公司生产的 h a

r试剂盒 m ,

,

带

4 50

r n u

滤光片酶标仪 。

,

全自动洗板机

可调微量 图 l

加样器 2

盒检测度肉精的标准曲线

y=

0 o54 lx

.

+

9

.

14 7一 RZ= 0 9772 .

样品处理一般情况尿样不用处理直接取上清尿样检测 ,。

5 。 .

注意事项

5 1

试剂盒在使用前应提前取出 。

,

使微孔板及所 ,

若尿样浑浊则一定要过滤或离心直至尿样清亮 3

有试剂回复至室温 5 2 ,

操作步骤 r i叩h按照德国拜发公司出品的 b a

不用的微孔板条 。

,

应立即放回原锡箔袋中 ,

r试剂盒内 m

尽量排除空气并与提供的干燥剂一起重新密封 回 2一 8℃保存 5 3 .

放

中文说明书的操作方法进行检测 3 1 .

。

洗板 ,

在实验过程中 ,

,

洗板是较为重要的步 ,

.

整个实验应在 2 0一2 5℃的环境下完成 ,。

。

骤之一

它直接影响到实验的有效性和准确性

一

5 4

酶结合物和抗体不宜在室温久放取用完毕 稀释了的抗体 ,,,

,

般要进行两次

第一次洗板是将二抗和一抗发生特 ,

放回 2一 8℃保存物更不稳定

特别是酶结合 。

异的抗原抗体反应后的游离抗体从板孔中洗去

若

不易保存

因此一定要现用现配 ,

底

清洗不够干净或让游离抗体污染了

洗涤用水或盒内

物溶液和色素原都不宜长时间暴露在空气中

应妥

其它试剂

,

则易造成酶标板最终反应未产生颜色或 。

善保存 6

。

吸光值偏低

若第二次洗板未能洗干净 ,

,

则会造成为了取得 ,

讨论运用 E

标准曲线变型

影响检测结果的判定 ,

。

I L

A S

检测 ,

“

瘦肉精

”

具备以下几个优

较好的检测结论 3 2 .

建议手工洗板在 。

5

次以上 ,

若用

点 n

:

①实验特异性强 ,

实验结果较为准确;②高度 ,

全自动洗板机则应在 8次以上 加样 ,

灵敏不得重复使 g

对尿液中盐酸克伦特罗的检测下限为 10 ③实验重复性强 ,

滴加样品或标准试剂时 。

k/

g;

用吸头 4

以避免交叉污染

重复试验 87% ,

笔者曾对 0 4个尿样做过 l定量分析结果误差在 o g n瓜g的为 20 0 ; n

结果判定

误差在 1%

g

众g的为

12% ,

,

误差在

300 ,

公式 0

:

n人 g的为 g X

④实验平行性高 ,

在检测过程中 ,

标准的吸光度值

100=

%吸光度

对标准液和样品做两个平行试验 5% 。

其相对误差小于 由一 ,

酶标法也有缺点

,

如出现非特异性反应 。

将所有获得的标准品或样品吸光度值的平均值 除以第一个标准 ( O标准 )吸光度的平均值再乘以 10

于酶促反应的有色产物会快速放大

实验中只要沾 因此 ,

少许酶分子就会产生明显的非特异反应

即得百分吸光度值

。

根据百分吸光度值和相对 ,

般将该方法做筛选法而不做仲裁法 (本期

。

应的盐酸克伦特罗浓度绘制标准曲线图 (图 1 )

X

P 0 4

一伪 9责任编辑

:

张爱华 )