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TUNEL细胞凋亡检测_DAB

TUNEL 细胞凋亡检测

试剂准备

生物素标记液配制

TdT酶 Biotin-dUTP 生物素标记液

1个样品 2μl 48μl 50μl

5个样品个样品 10μl 240μl 250μl

20μl 480μl 500μl

Streptavidin-HRP工作液的配制(注意:配制好的Streptavidin-HRP工作液必须一次使用完毕,不宜冻存)

Streptavidin-HRP 稀释液 Streptavidin-HRP 工作液

DAB显色液的配制:

每个样品使用0.2-0.5ml显色液,等体积混合适量DAB显色液A和DAB显色液B,充分混匀后即为DAB显色液。(注意:配制好的DAB显色液必须一次使用完毕,不宜冻存。)

1个样品 49μl 50μl

5个样品个样品 245μl 250μl

490μl 500μl

操作规范流程

1. 二甲苯中脱蜡5-10分钟,换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟,无水乙醇5分钟,

90%乙醇2分钟,70%乙醇2分钟,蒸馏水2分钟。

2. 滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K(用pH8.0 10mM Tris),20-37℃作用15-30

分钟(不同组织的最佳作用温度和时间需自行摸索),用PBS洗涤3次(注意:这一步必须把蛋白酶K洗涤干净,否则会严重干扰后续的标记反应。)。 3. 在用PBS配制的3%过氧化氢溶液(3% H2O2 in PBS)中室温孵育10分钟,以灭活切

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