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反复冻融法

细胞冻融法:

1,Tca8113细胞置于含10%FBS的RPMI1640中培养7 d,取对数生长期的细胞,0.25%胰蛋白酶消化

2,用RPMI1640培养基制成细胞悬液,1 000 r·min-1离心5 min

3,PBS洗细胞2次,PBS调整细胞密度为每毫升1×107个,放入离心管内,封口

4,于43 ℃水浴中静置30 min,置于-80 ℃冰箱中快速冷冻20 min,再迅速放入37 ℃水浴中解冻10 min,反复4次

5,2 000 r·min-1离心20 min,取上清液

6,0.22 μm微孔滤膜过滤除菌后即为肿瘤冻融抗原,分装,4 ℃保存。

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