鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及序列分析

农业生物技术学报

,

鸡传染性法氏囊病病毒 刘小军

基因的克隆及序列分析 陈楠陈永福 ,

中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 摘要用幼鸡成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒

北京 。

天水 一

毒株和 ,

一

毒株 一

用提纯的 ,

病毒颗粒提取基因组 一

。

根据已报道的获得的两个 之间 ,

英国

株的序列设计引物

用反转录 ,

聚合酶链式反应 ,

进行

〕

扩增

,

的片段分别克隆于

载体

亚克隆后进行序列分析 。

并与已报道的

株

的 、

基因的核普酸序列及推导的氨基酸序列进行了比较 ,

结果表明 一

不同毒株间 , 、

核普酸同源性介于 为 与 同 ,

其中 。

与 , 一

一

以及

、

一

与 。

、

间的同源性最高 以及 ,

, 、

。

不同毒株间推导的氮基酸同源性介于间的同源性最高

之间

其中

与

一

为

月

与 ,

高变区内两个亲水区域与其它标准 一

型毒株完全相

而在致病毒株中保守的

位

肤区中 基因

和

的第

位丝氨酸突变为精氨酸

说明

与

一

为标准 关键词

型弱毒株

。

鸡传染性法氏囊病病毒

克隆和序列分析 。

鸡传染性法氏囊病

是急性

、

高度传染性杀淋巴细胞疾病 ,

其病源鸡传染性法氏囊病病毒 ,

均

主要感染 ”,

周龄幼鸡的体液免疫系统法氏囊 。

导致病鸡严重的免疫抑制或死亡 ,

给养鸡业带

来巨大的经济损失 构 ,

属双链双节段呈正二十面体’ ,,

病毒科 。

,

病毒颗粒为单层衣壳结构 血清

周围无囊膜 。

,

是典型的六边形结型从火鸡中分离 。

‘

,

有两种血清型 但无致病力 ,

型从病鸡中分离 、

,

具致病力

血清

,

也可以感染鸡和火鸡 。卜叼

’

。

其基因组由

两个双链 ,,

节段组成

片段为

一

编码的病毒蛋白 片段为 一

被认为是病毒的编码一个 ,

聚合酶

并具有甲基转移酶和鸟普转移酶的活性 经加工后形成分子量不同的四种蛋白质 ,

的多聚蛋白

一

,川

。

其中

是最主要的病毒结构蛋白并携带有宿主保护性抗原决定簇 ”, 。

可诱导产生保护性中和抗 ,

体

,

且具有血清型特异性 ,

因此

,

基因的克隆及其变异的研究就显得十分重要 ,

世界许多国

家对流行于本地的 基因 ,

基因的结构及变异情况进行了研究

试图从分子水平上揭示旧 ,

的结

构与功能的关系找出更为有效

的

防治措施 ,

‘,

’

。

本研究的目的就是克隆我国不同地区的旧 并为基因工程疫苗的生

对其核普酸序列进行比较分析 。

探讨不同毒株间变异的分子机制

产莫定基础

材料与方法 病毒和试剂维细胞的细胞毒株反转录酶 、。

天水 一一

毒株由中国农业科学院兰州兽医研究所分离是适应了鸡胚成纤毒株购自中国兽药监察所也是适应了鸡胚成纤维细胞的细胞毒株 ,

,

。

载体购自 。

公司 。

。

连接酶 。

、

、

肋 、

、

等限制性内 一

切酶均购自华美生物工程公司 本室保存 ℃的二 。

聚合酶为本室生产公司

万

,。

菌株

质粒等为 ,

测序试剂盒购自

病毒的繁殖和提纯

用常规方法培养鸡胚成纤维细胞 一 ,

。

长成单层后按一定滴度接种 后 ,

于 于

氧化碳培养箱中继续培养

细胞病变达

经

次冻融收集细胞培养液

,

国家自然科学基金资助项目

刘小军

男

,

一

生

,

博士

,

副教授

收稿日期

一

一