利用免疫共沉淀技术研究RSVCP_SP和NSvc4蛋白的互作

农业生物技术学报ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２００８，１６（５）：８９１￣８９７

研究论文··

利用免疫共沉淀技术研究ＲＳＶＣＰ、

ＳＰ和ＮＳｖｃ４蛋白的互作＊

鹿连明，秦梅玲，王

萍，兰汉红，牛晓庆，谢荔岩，吴祖建＊＊，谢联辉＊＊

（福建农林大学植物病毒研究所，福建省植物病毒学重点实验室，福州３５０００２）

摘要：为了检测水稻条纹病毒（Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅｖｉｒｕｓ，ＲＳＶ）外壳蛋白（ｃｏａｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＰ）、病害特异蛋白（ｄｉｓｅａｓｅ－ｓｐｅｃｉａｌｐｒｏｔｅｉｎ，ＳＰ）和可能的运动蛋白ＮＳｖｃ４自身和两两之间的互作关系，首先通过ＰＣＲ扩增获得了分别融合有ＨＡ或ｃ－Ｍｙｃ标签的ＲＳＶＣＰ、

ＳＰ和ＮＳｖｃ４基因，并将其插入到植物表达载体ｐＥＧＡＤ或ｐＫＹＬＸ７１：３５Ｓ２中。重组质粒转化根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅ－ｆａｃｉｅｎｓ）ＥＨＡ１０５后，将含有不同重组质粒的根癌农杆菌菌液混合后注射烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）叶片。提取烟草中瞬时表

达的蛋白，以ＨＡ或ｃ－Ｍｙｃ抗体进行免疫共沉淀试验，最后免疫混合物通过ｃ－Ｍｙｃ抗体或ＨＡ抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测，确定蛋白的互作情况。结果表明，ＲＳＶＣＰ蛋白自身能够发生互作，而ＣＰ与ＳＰ，ＣＰ与ＮＳｖｃ４，ＳＰ与ＳＰ，ＳＰ与ＮＳｖｃ４，及ＮＳｖｃ４与

ＮＳｖｃ４蛋白之间均未有检测到互作现象。

关键词：水稻条纹病毒；免疫共沉淀；蛋白互作中图分类号：Ｓ１８８

文献标识码：Ａ

文章编号：１００６－１３０４（２００８）０５－０８９１－０７

ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎＲＳＶＣＰ，ＳＰａｎｄＮＳｖｃ４

ＰｒｏｔｅｉｎｓＵｓｉｎｇＣｏ－ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

ＬＵＬｉａｎ－ｍｉｎｇ，ＱＩＮＭｅｉ－ｌｉｎｇ，ＷＡＮＧＰｉｎｇ，ＬＡＮＨａｎ－ｈｏｎｇ，ＮＩＵＸｉａｏ－ｑｉｎｇ，

ＸＩＥＬｉ－ｙａｎ，ＷＵＺｕ－ｊｉａｎ＊＊，ＸＩＥＬｉａｎ－ｈｕｉ＊＊

（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｎｔＶｉｒｏｌｏｇｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔＶｉｒｏｌｏｇｙｏｆＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，

ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＲｉｃｅｓｔｒｉｐｅｖｉｒｕｓ（ＲＳＶ）ｃｏａｔｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＰ），ｄｉｓｅａｓｅ－ｓｐｅｃｉａｌｐｒｏｔｅｉｎ（ＳＰ）ａｎｄＮＳｖｃ４，ｔｈｅＨＡ－ｔａｇｇｅｄｏｒｃ－Ｍｙｃ－ｔａｇｇｅｄＣＰ，ＳＰａｎｄＮＳｖｃ４ｏｆＲＳＶｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲ，ａｎｄｔｈｅｎｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｐｌａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＧＡＤｏｒｐＫＹＬＸ７１：３５Ｓ２．ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＥＨＡ１０５，ａｎｄｔｈｅＥＨＡ１０５ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｗａｓｉｎｊｅｃｔｅｄｉｎｔｏＮｉｃｏｔｉａｎａｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ．Ｔｈｅｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ

Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｄＮ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａｌｅａｖｅｓ，ａｎｄｃｏ－ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄｗｉｔｈＨＡｏｒｃ－Ｍｙｃａｎｔｉｂｏｄｙ．ＴｈｅｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｌｅｘｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗｉｔｈｃ－ＭｙｃｏｒＨＡａｎｔｉｂｏｄｙｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｓｅｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＲＳＶＣＰｃｏｕｌｄｉｎｔｅｒａｃｔｗｉｔｈｉｔｓｅｌｆ，ｂｕｔｎｏｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆＣＰｗｉｔｈＳＰ，ＣＰｗｉｔｈＮＳｖｃ４，ＳＰｗｉｔｈＳＰ，ＳＰｗｉｔｈＮＳｖｃ４，ａｎｄＮＳｖｃ４ｗｉｔｈＮＳｖｃ４ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅｖｉｒｕｓ；ｃｏ－ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ；ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ

水稻条纹叶枯病是我国水稻产区广泛分布的重要病毒病害之一，给水稻生产带来了严重的危害。该病病原为水稻条纹病毒（Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅｖｉｒｕｓ，ＲＳＶ），是纤细病毒属（Ｔｅｎｕｉｖｉｒｕｓ）的代表成员，由昆虫介体灰

飞虱（Ｌａｏｄｅｌｐｈａｘｓｔｒｉａｔｅｌｌｕｓ）以持久方式经卵传播（谢联辉，２００１），具有很广的寄主范围，可以侵染１６个属８０多种的禾本科植物（阮义理等，１９８４）。ＲＳＶ是一种多组分ＲＮＡ病毒，其基因组由４种单链ＲＮＡ

＊基金项目：国家重点基础研究发展规划（９７３）项目（Ｎｏ．２００６ＣＢ１００２０３）、教育部博士点专项科研基金（Ｎｏ．２００４０３８９００２，２００５０３８９００６）

和国家自然科学基金（Ｎｏ．３０６７１３５７）资助。

＊＊通讯作者。Ａｕｔｈｏｒｆｏｒｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ．谢联辉，教授，主要从事植物病毒学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：＜ｆｊｘｌｈ＠１２６．ｃｏｍ＞；

吴祖建，副研究员，主要从事植物病毒学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：＜ｗｕｚｕｊｉａｎ＠１２６．ｃｏｍ＞．收稿日期：２００８－０１－２３

接受日期：２００８－０２－２７