聚丙烯酰胺凝胶电泳 PCR 双向电泳 质粒提取

聚丙烯酰胺凝胶电泳 PCR 双向电泳 质粒提取

SDS-PAGE

1.SDS-PAGE配制过程中，浓缩胶与分离胶可预先配好大体积（如100ml）预制胶，储存在4度冰箱（注：10% APS，TEMED不加），每次配置时只需吸取所需体积的预制胶加入相应体积APS，TEMED即可，预制胶可储存半年以上，能节省很多时间，更重要的是，可大大减少与丙稀酰胺的接触，减少中毒。

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2.配胶过程中，普通的SDS-PAGE中加入约13%的甘油，可以提高分辨率，有效防止小分子量蛋白的弥散。改进过程只需将配方中的水改成60%的甘油即可。doc.guandang.net

3.胶配好后，若过夜使用，待凝聚后不要拔下梳子，把含胶玻璃板从制胶槽取下，注意玻璃板上下两边缘会有气体，所以需要加一点电泳缓冲液以避免胶内水分蒸发，用保鲜膜包上，然后放4度过夜，第二天在电泳槽内直接拔下梳子即可使用。

4.分离胶用水压胶不平时，可以换用乙醇（浓度无要求，干净即可），效果较好。

5.配置分离胶时因胶凝时收缩常导致加样孔变浅，可以将加剩的胶放入4℃以降低凝聚速度，而将凝胶放入37度促聚，并随时用4℃加剩的胶补充下降的胶面；另外将胶横放与水平面成10度角也可以减少收缩的影响。

6.丙烯酰胺放置时间过长（超过一年），会吸水潮解，导致胶不凝。

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7.凝胶时温度高凝胶快，但过高时，会影响交连物的孔径大小，25℃为宜。

8.氧气是胶凝固的终止剂，所以尽量避免胶中气泡出现。

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9.大肠表达检测时，一般要煮样，但煮出来时常较稠，用8M尿素重悬细胞后再煮效果较好。

10.配好的10×TBE经过高压灭菌后，不会形成沉淀，可以用很长时间，而且跑出的条带也很漂亮。

11.上样时，最后保证上样量一样，包括体积，当体积不同时，可以加缓冲液补全，这样跑出的胶较为一致。所有的加样孔都加样，可以防止边缘的样品拖尾，如样品不多，其余的孔均用上样缓冲液加满，防止影响条带扩散。

12.跑胶时，因为低电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形，所以低电压泳道会比高电压泳道跑的直一些，且分离效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分离。doc.guandang.net