液相色谱论文

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高效液相色谱技术的应用

生物技术及应用 王伟 20090708018

高效液相色谱自20世纪70年代问世以来，凭着其自身显著的优势，经过近30年的发展，在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟，现在已成为化学学科中最有优势的分离分析方法之一。

与其它的分离方法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：应用了颗粒极细(一般为10 ton以下)、规则均匀的固定相，传质阻抗小，分离效率高，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍；采用高压输液泵输送流动相，分析时间短，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时；广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了检测灵敏度。因此，HPLC的应用范围非常广，百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

以下就具体介绍一下高效液相色谱法在国内外应用：

1.HPLC在食品领域的应用

① HPLC在食品营养成分领域的应用 包括对碳水化合物的检测、维生素的检测、氨基酸的检测、脂肪酸的检测等，HPLC法操作简便，重现性好，色谱分离时间短且分离度好。已经逐渐取代了传统的检测方法。

② HPLC在食品添加剂领域的应用 目前，我国有20多类、近1 000种食品添加剂，合理使用添加剂对人体健康以及食品都是有益无害的，但如果不加以限制使用，对人体健康会产生危害。HPLC可以分别对食品甜味剂，防腐剂，色素以及抗氧化剂等进行检测。

③ HPLC在食品污染物领域的应用 HPLC可以检测食品中农药、兽药的残留以及食品中其他来源的化学污染物，西维因、多菌灵和狄氏剂等150多种农药都可以用HPLC法进行分离或分析，在啤酒中时有发现的致癌性很强的亚硝胺类化合物，利用反相色谱法能快速、准确地检测。

2.HPLC在药品检验中的应用

高效液相色谱法在1985年版《中国药典》中收载后，为药品检验工作更高效、灵敏、准确地进行药物质量控制奠定了基础，并迅速成为药品检验采用的主流分析方法之一。

① 鉴别中的应用 在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数之一，可用于药物的鉴别。 ② 有关物质检查中的应用 因HPLC法具有简便、快捷、专属、准确等优势，其已成为检测有关物质的主流方法。 ③ 含苣测定中的应用 HPLC法具有分辩率高、分析速度快，重复性好、样品用量低、自动化程度高等优点，在定量测定时极具优势其中大部分是反相色谱，也有吸附色谱、离子交换色谱等。

④ 中药成分检验 中药是一个多成分的复杂体系，通过各成分之间的配伍组合，达到最佳治疗效果。由于成分多样和复杂，成分分析较为困难。HPLC法可以将各成分或待测成分与其他杂质进行有效的分离，达到进行鉴别、检查、含量测定的目的。近几年，HPLC法在中药检验中，应用越来越广泛，《中国药典》2010年版(一部)收载的含量测定方法以HPLC法为主。HPLC法作为现代药物分析中最高效、快捷的方法之一，在中药检验领域的广泛应用大大促进了中药质量的标准化与规范化的进程。

3.HPLC新技术及其应用

① 高效液相色谱—质谱联用技术(LC—MS，简称为液—质联用技术) 液—质联用技术将色谱技术的高分离能力与质谱技术的高灵敏和结构解析能力成功结合，成为应用广泛的分离检测技术。

② 高效液相色谱—蒸发光检测技术(HPLC—ELSD) 《中国药典》201O年版中，蒸发光散射检测器(ELSD)作为除紫外检测器(UVD)使用频率最高的检测器，获得推广应用。ELSD是一种通用型检测器几乎对所有不挥发性溶质均有响应。灵敏度高，检出限达到lOng，不受溶剂成分及温度波动的影响，可用于梯度洗脱，目前已广泛应用于分离中的各个领域。

③ 快速高效液相色谱技术(UPLC／RRLC／UFLC) 近年来，快速高效液相色谱技术的发展与应用有效的弥补了传统高效液相色谱技术在分析中的不足，使分离分析进入了高效、高通量的阶段。该技术的主要特色是通过优化色谱分离参数，增加柱效，同时使分析时间大为缩短，节省溶剂，减少污染。与传统HPLC相比，UPLC／RRLC／UFLC解决了系统整体的耐压问题，具有极高的柱效，带来了超高速度、超高分离度、超高灵敏度等明显优势。

PHLC在石家庄也有很广泛的应用，石药集团就有应用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中的维拉帕米（Ver）的相关报道，Ver是第一代钙离子拮抗剂，临床上主要用于心律失常，心绞痛和高血压的治疗。应用LC-MS/MS可使样品的绝对回收率为79.6%,定量下限为5.0μg/L，了灵敏度高于其他文献的报道，具有专属、快速、灵敏的特点，适合并已成功的应用于临床维拉帕米药代动力学的研究。

高效液相色谱技术作为一种十分有效的分析分离手段，已经广泛应用于石油化工、生物化学、食品卫生、医药工业等领域。一些色谱技术的相互结合解决了传统液相检测器灵敏度和选择性不够的缺点，提供了可靠、精确分析结果，简化了试验步骤，节省了样品准备时间和分析时间，随着技术的不断改进与发展，相信不久的将来，高效液相色谱必将在更多的领域发挥重要作用。