Lightsheet内窥镜探头
为了能实时在体观测生物组织如大脑神经元细胞,显微镜探头尺寸必须降低到最小,因此小型光片内窥镜的探头使用梯度折射率透镜作为探头透镜组的基本透镜。国外实验室对于利用梯度折射率透镜搭建光片内窥镜已有一些成果,其中比较完善的光片内窥镜结构原理图如图1所示,这套系统不仅通过自聚焦透镜实现了光片激发而且还设置了落射式激发光路作为成像对比。
图 1
(引用至“Miniaturized selective plane illumination microscopy for high-contrast in vivo fluorescence imaging, Christoph J. Engelbrecht, etc, Optics Letters, 35-1413, 2010”) 激光通过偏振分光镜一路耦合进光纤进入GRIN1透镜组,另一路经过一个伽利略望远镜系统耦合入光纤束进入GRIN2透镜组。其中光纤传像束为一段特殊光纤,其纤芯区域由许多根纤芯按阵列排列而成,如此一来当光纤传像束之前的光学系统在光纤束端面处呈实像时,在光纤束的另一端端面处会成一个1:1等大的像。GRIN1透镜组由一个1/4pitch的自聚焦透镜、一个一维折射率的小于1/4pitch的自聚焦透镜,一段用作空间光路介质的玻璃柱体和一个转角棱镜组成,其中1/4pitch梯度折射率透镜实现的功能是将从光纤发出的有一定发散角的激发激光整形为准直光,一维透镜的功能是将准直光汇聚,使其在经过一段空间光路后的焦点处产生光片,直角转角棱镜的功能为使荧光激发面旋转90度与成像光路像方焦平面相重合。GRIN2透镜组由两个不同数值孔径的自聚焦透镜组成,成像光路在之前小节中已经阐述,此处不再多述。当该系统工作在光片成像模式时,激发光进入GRIN1并在成像光路像方焦平面出形成光片,激发这一区域内的荧光物质产生荧光。产生的荧光被GRIN2收集并成像于透镜组末端即光纤传像束的端面上导出至探头外,最后经过一个显微成像系统成像于相机中观测。

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