Methods in Mammalian Autophagy Research(哺乳动物自噬研究方法)

哺乳动物自噬研究方法

自噬和许多生理和病理过程相关。因此，有一个持续增长的科学需要来精确的鉴定、量化并对自噬进行操作。然而，自噬包含许多动态的复杂的过程，它经常被错误的分析。在这篇读物中，我们通过主要关注哺乳动物的大自噬来讨论观察自噬和调控自噬活性的方法。

简介

过去的十年见证了一种叫做自噬的基本的细胞生物学途径的研究的爆发。自噬需要的进化上保守的基因的发现使得科学家们能够发现自噬的稳态、发育和其他生理功能。不仅如此，越来越多的证据表明自噬的反常可以导致一系列的哺乳动物疾病。因此，对于科学家来说有一个急剧增长的需要去精确的探究自噬并且研究其在不同生物学事件中的作用，尤其是在哺乳动物体系中。

哺乳动物自噬的研究被历史上两个主要的问题所困扰。第一，用静态的分析来捕获动态的过程是有难度的，基于这些分析手段进行推断是有内在的限制的。第二，区分形态和功能并且避免陷入基于给定的生理学设定的检测来赋予自噬生理学功能的陷阱。这两个挑战似乎成了我们错误的理解哺乳动物自噬功能的源泉。比如，特定的神经和肌肉退行性疾病起初被认为至少部分和增多的自噬（基于显微镜对于通路中增多的中间体的观察）是相关的，然而事实上，在这些疾病中早起中间体的积累可能会阻断其晚期的自噬过程。自噬，一个临死细胞正常的形态学特征，常被错误的认为是细胞死亡的途径，然而现在看来其主要的功能之一是在“威胁生命”的环境下来维持细胞的生存。

这些哺乳动物自噬研究的历史性的挑战在阐明自噬的分子机制时通过利用先进的自噬研究的新方法被部分克服了。因此，在过去的十年，大量的新方法被用来观察自噬的动态过程以及为了在特定的细胞过程中研究自噬的功能来调节它。这篇文章是为了现在自噬研究可用的技术以及在解释中存在的限制提供一个综述。每一种方法的更加详细的信息可以在其他综述中找到。

自噬的基础知识

自噬是细胞质中物质包括细胞器到达溶酶体被降解的一些过程的总称。在自噬的三种类型（大自噬，小自噬和蛋白伴侣介导的自噬）中，研究的最深入的是大自噬。蛋白伴侣介导的自噬包含了胞质蛋白定向转运到溶酶体膜的过程，这一

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