利用甘蔗糖蜜发酵生产酵母单细胞蛋白的菌种选育

以甘蔗糖蜜作为发酵原料,经过摇瓶发酵培养,筛选得到一株总蛋白得率较高的啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)S9。以S9为出发菌株进行^60Co诱变选育实验,筛选到一株高生物量高蛋白含量的S906突变菌株,在相同的发酵条件下,生物量为11.25g／L,蛋白质质量分数为45.96%,总蛋白质得率达5.17g/L,比诱变前增加了39.0%。S906传代10次,其生物量、细胞粗蛋白含量无大的变化

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利用甘蔗糖蜜发酵生产酵母单细胞蛋白的菌种选育 何海燕一覃拥灵， 楠李涛 ,一李， (. 1河池学院化学与生命科学系，广西宜卅 5 60; . I 4 30 2广西大学生命科学与技术学院，广西南宁 5 0 0 . 30 4 )摘要：以甘蔗糖蜜作为发酵原料，经过摇瓶发酵培养，筛选得到一株总蛋白得率较高的啤酒酵母 ( acao ye cr ia ) S ch r cs e vie m es

s。以 s出发菌株进行 c诱变选育实验， 9 9为 o筛选到一株高生物量高蛋白含量的￥ 0 9 6突变菌株，在相同的发酵条件下，生物量为 l,5 L蛋白质质量分数为 4 .6, l2, 5 9%总蛋白质得率达 5 1 L比诱变前增加了3 .% . 9 6传代 1,生物量、 .7, 90 .￥0 0次其 细胞粗蛋白含量无大的变化，明该菌株遗传性状稳定，表经过改良可作为工业化生产单细胞蛋白菌株。 关键词：甘蔗糖蜜；发酵；单细胞蛋白； C诱变； 6 o o筛选中图分类号：86 4￥ 1.文献标识码： A文章编号：0 3— 2 2 2 0 )2—0 2 10 6 0 (06 1 0 8—0 3 S r e igo a tS r i o r d cn ige CelP oen b e m e tto fS a n oas s c e nn fYe s tan f rP o u ig Sn l l r ti y F r n ain o ug r Ca eM lse ABS ACT:Usn u a a emoa ssa r nainsb tae a c ao c sc rvsa t i 9w so tie TR igsg rc n lse st me tt u srt。aS c h rmy e ee i es ans a ban d娟 e r nig e o i r rf me t e n a d ga u l ce nn .a tte rae i C a it nt e o iv mtt ny at t i 9 6 ta o tie r imasa d n rd a re ig n1h nte tdw t s h ordai og t p st en ai e s sr n s 0 h t nan dmoebo s n o a i o a c p oen r ti .Un e h a e me t

t n c n i o s h ima swa p t 1 2 / d rt e s me fr n ai o d t n -t e bo s s u o l . 5 mg L,p o en c n e to h e s c l w s u 0 4 . o i r t i o tn ft e y a t et a p t 5

9% a dttlpoen cne ta u tdt 1 6 n a rti o tn mo ne o5.7 m L。 ihw sl9 hg e a h tb fr tt n tans 0 a rnfr d o whc a 3% ih r h nt a eoemuai .Sri 9 6 w sta ser t o e 1 i s u sb o s n r d rt i o tn n c l r h n e o g e t .Th e u t h w d t a h ssri a tb e g - 0t me,b t t i ma s a d c u e p oen c n e ti el we ec a g d n t r a l i s y e r s l s o e h t i tan h d s l e t a

n t h rc eit sa d c ud b s d f ri d sra r d ci n o i ge e 1 r ti f ri r v me t e i c a a trsi n o l e u e o n u t lp o u t fsn l e]p o en at mp o e n . c c i o e KE YW ORDS:s g rc n ls e;fr e t t n;S P;鲫C tt n:s r e i g u a a e m0a s s e m n ai o C o mua i u ce nn

随着人民生活水平的提高，对营养价值高的蛋白质的需求愈来愈多…。单细胞蛋白所含的营养物质极为丰富，白蛋 质质量分数高达 4%~8%, 0 0含有人体必需的 8种氨基酸。 此外，还含有多种维生素、水化合物、碳脂类、物质以及丰矿富的生物活性物质，广泛运用于食品和饲料工业中。单 细胞蛋白可以作为来源不足的蛋白质原料的重要补充，意义 十分重大。 可用于生产单细胞蛋白的微生物种类很多，包括细菌、

1 13仪器 ..

B C M N2 2高速冷冻离心机、P20电子天平、 A K A J— 1 Y 10型 S X一 5 P 20型宅化培养箱、 Q 3O H L O A柜式恒温冷冻摇床、 1— 1 0 2 B一 S电热恒温鼓风干燥箱、糖用锤度计、 0 HM t

。 3 er 2p e 1 14培养基 ..麦芽汁斜面培养基 (质量分数)麦芽汁 1%,: 0琼脂 2。%种子培养基 (质量分数)糖蜜 1.%,: 0 5硫酸铵 0 1, .%磷

放线菌、酵母菌、霉菌以及某些原生生物。酵母菌生长繁殖迅速，培养条件简单，营养物质含量高，无致病作用，味道好而且易消化吸收，是生产单细胞蛋白的优良菌种。甘蔗糖蜜是甘蔗制糖的主要副产物，总糖分在 5%左右， 0含有维生素及微量元素等多种可利用成分，是发酵生产酵母的良好原料…。笔者开展 r以甘蔗糖蜜为碳源发酵培养单细胞蛋白酵母的实验研究，并利用 c o辐射埘初筛酵母菌株进行了诱变处理，高了菌株的生物量及蛋白质含量，提为后续发酵工艺研究提供了优良菌种。 1材料与方法 11材料 .

酸■氢钾 0 1, .%七水硫酸镁 0 0%,t值 5 .4 p{。摇瓶发酵培养基：同种子培养基，H值 55 p .。筛选平板培养基 (质量分数 )糖蜜 1.%,: 05硫酸铵0 1 .%,磷酸二氢钾 01, .%七水硫酸镁 00%, . 4琼脂 2,H值 55% p .。 1 2方法 .

1 2 1菌种初筛 ..将保藏菌种转接至麦芽汁斜面培养基，8C 2￣培养 4 8h活化菌种；活化的斜面菌种制成菌悬液，常规方法稀释涂将按平板。选取大而圆的菌落接种于种子培养基， 8, 2℃ 10rm n养 2 8 i培/ 4 h制成种子液； 1%接种量、液量按 0装

11 1菌种 ..产朊假丝酵母 ( a t a ul )购自中国普通微生物菌 C m i tl: d i s种保藏管理中心， 1,共株编号为 C; 1

10ml 0 l 0/ 0m三角瓶、8C、8/ i 5 2 o 10 rmn摇瓶发酵培养 4, 8 h收集菌体测其生物量和细胞粗蛋白含量，选取总蛋白得率最高的茼株进行下一步实验。 1 22初筛菌株生长曲线的测定 ..

粘红酵母 ( hdt uagu n )本实验室保存共 1, R ooo l lt i: r is 4株编号依次为 R—R 4; l 1啤酒酵母：本实验室保存共 1, 0株编号依次为 s—S0 l l。 1 1 2培养材料 ..麦芽汁为购买啤酒厂麦芽参照文献[] 8处理配制，糖蜜由广西南宁糖业公司明阳糖厂提供，文献

[]按 9进行预处理获得糖蜜酸化水解液。 收稿日期：0 6—1 5;回口期：06一l 2 20 0~2修 20 l一 4

菌株发酵培养从 5h 后开始，每隔 2h 取样测其 O D值， 以培养时间为横坐标， D值为纵坐标绘菌株生长曲线， O选择处于对数生长期的细胞进行诱变实验。 1 23 C诱变实验 . o 1 23 1“ o诱变致步率曲线 ...’ C E 将 1无菌生理盐水转入活化的斜面菌种， 0ml洗下菌种倒入装有玻璃珠的三角瓶中，根据生长曲线，8/ i 10rm n培养至对数生长期制成单细胞悬液，利用无菌牛理盐水调整菌悬液浓度为 l个/ l分装十小玻璃管中，别用 5 5万、 0 m,分 .

作者简介：何海燕( 9 2,, 17一)女讲师，硕士研究生，主要从事应用微生物学研究