琼脂糖凝胶电泳检测DNA

一、实验目的琼脂糖凝胶电泳检测DNA 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测 DNA的方法和技术，检测上次实验课提取的质粒DNA

二、原理 带电物质在电场中的趋向运动称为电泳。凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为蛋白质、核酸研究的首选标准方法泳动率是带电颗粒在一定的电场强度下，单位时间内在介质中的迁移距离。泳动率与样品分子所带的电荷密度、电场中的电压及电流成正比，与样品的分子大小、介质黏度及电阻成反比。不同大小的带电分子具有不同的泳动率，在不同的介质条件下又具有不同的分辨效率影响泳动率的因素包括样品的物理性状、支持物介质、电场强度和缓冲液离子强度 DNA的凝胶电泳常使用两种支持介质：琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶

琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应在碱性缓冲液中DNA分子带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型琼脂糖凝胶电泳不仅可以分离不同相对分子质量的DNA,也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子可以分离长度为100bp至近60kb的DNA分子，常采用 TAE、TBE和TPE三种缓冲体系

pUC18质粒，有3种构型： ( covalently closed circular DNA,简称CCCDNA),开环质粒 DNA,即共价闭合环状质粒 DNA 1条链断裂 ( open circular DNA,简称OCDNA),线状质粒 DNA,即共价闭合环状质粒 DNA2条链发生断裂(linear DNA,简称L DNA)。

不同形状的DNA分子在琼脂糖中的迁移率不同形状的DNA分子在琼脂糖中的迁移率 从细菌抽提得到的质粒 DNA样品中不含线状 DNA Linear DNA超螺旋, CCC, covalently-closed circular DNA

超螺旋的共价闭合环状质粒 DNA

松弛型，OC, Open circular DNA

OCDNA LDNA CCCDNA

电泳方向

这3种构型的质粒DNA分子在凝胶电泳中的迁移速度不同。因此电泳后呈3条带，超螺旋质粒DNA泳动最快，其次为线状DNA,最慢的为开环质粒DNA。