紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡及其机制的研究_余思云

·1930·

辽宁中医杂志2013年第40卷第9期

紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡及其机制的研究

余思云，李运延，胡国华

（上海中医药大学附属市中医医院，上海200071）

摘要：目的：研究紫草素诱导体外培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡作用及其机制。方法：流式细胞术分析细

2、Bax蛋白的表达。结果：紫草素可诱导细胞凋亡，改变细胞胞周期分布及凋亡率变化；免疫组化法（SABC法）检测Bcl-2基因周期分布，多数细胞周期阻滞于G1期，细胞凋亡率差异有统计学意义（P＜0.05）；紫草素可上调Bax和下调Bcl-与空白组对照差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：紫草素能够诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡，其凋亡蛋白的表达，

Bcl-2下调相关。机制可能与促进Ishikawa细胞中Bax上调，2关键词：紫草素；Ishikawa细胞株；Bax；Bcl-中图分类号：Ｒ285文献标志码：A文章编号：1000－1719（2013）09－1930－03

MechanismsofShikonin－inducedApoptosisinIshikawaCells

YUSiyun，LIYunyan，HUOGuohua

（ShanghaiHospitalofTCMAffiliatedtoShanghaiUniversityofTCM，Shanghai200071，China）

Abstract：Objective：ToinvestigateapoptosiseffectsandmechanismsofShikoninonhumanendometrialcarcinomacellline－

Ishikawa．Methods：Evaluationofcellcycleandapoptosiswasascertainedrespectively，whichusedtrypanblueexclusionandflowcytometry．TheproteinexpressionofBcl-2andBaxwasdetectedbyimmunohistochemicalmethods．Ｒesults：Shikonincouldinduce

theapoptosisofIshikawacells，changecellcyclepercentageandblockcellcycleinG1．Therewassignificantdifferenceintheap-optoticpercentofcell（P＜0.05）；Shikonincanup-regulategeneexpressionofBaxanddown－regulategeneexpressionofBcl-2．TherewassignificantdifferencebetweenShikoningroupsandcontrolgroup（P＜0.05）．Conclusion：Shikonincouldpromoteapop-tosisinIshikawacells．Themechanismmaybeassociatedwiththegeneexpressionofup－regulationofBaxandinhibitionofBcl-2．

Keywords：Shikonin；Ishikawacells；Bax；Bcl-2子宫内膜癌是女性最常见的生殖道恶性肿瘤之一，占女性全身恶性肿瘤7%，占女性生殖道恶性肿瘤

［1］

的20%～30%。子宫内膜癌主要发生于绝经后妇女，其发病病因尚不完全清楚。目前，手术仍是治疗子宫内膜癌的首选。子宫内膜癌早期阶段整体预后良好，但是晚期生存率低且容易复发。

紫草素是从天然紫草中提取的萘醌类化合物，具

［2］

有广谱的生理学和药理学活性。研究发现紫草素具有抗雌激素作用，且对人类多种肿瘤细胞具有诱导其凋亡的作用，但对子宫内膜癌细胞的研究报道尚未发现。本研究就紫草素对人子宫内膜癌Ishikawa细胞的体外抗凋亡的作用进行研究，旨在探讨紫草素的抗肿瘤作用及其机制。1材料与方法1.1材料

1.1.1细胞株人子宫内膜癌Ishikawa细胞株（上海

收稿日期：2013－03－09

基金项目：上海市卫生三年行动计划海派基地建设项目（ZYSNXD－CC

－HPGC－JD－008）

作者简介：余思云（1987－），女，江西人，硕士，研究方向：中医妇科生殖

调节。通讯作者：胡国华（1952－），男，上海人，主任医师，博士研究生导师，硕

E-mail：士，研究方向：中医妇科生殖内分泌及感染等，

hgh0083@yahoo．cn．

交通大学第一人民医院）。

1.1.2药物紫草素（10mg干燥粉末，纯度为98%）购自中国药品生物制品检定所。用5%二甲基亚砜（DMSO）助溶，配制成浓度为1mg/mL备用，无菌过

－20℃保存。实验时在用DMEM培养液稀释至所滤，

需浓度。1.1.3DMEM、试剂及仪器胎牛血清（FBS）、0.25%胰蛋白酶均为Gibco公司产品；4，5－二甲基噻

5－二苯基四氮唑溴盐（MTT）购自美国唑－2）－2，

AMＲESCO公司；浓缩型SABC试剂盒（血清封闭液、二抗、三抗SABC）购自博士德公司。1.2方法

1.2.1细胞株培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株接种于含10%灭火胎牛血清的DMEM培养液中，在37℃、5%CO2及饱和湿度的恒温箱中培养，每1～2天换液。取对数生长期的细胞进行实验。

1.2.2流式细胞术检测细胞周期及其凋亡率采用PI单染及AnnexinV/PI双染法。取对数生长期的Ish-ikawa细胞接种于6孔板，培养24h待细胞贴壁后，分

0.3、0.5、0.7μg/mL的紫草素，别加入含终浓度为0、

6

70%作用细胞48h后，常规消化收集1×10个细胞，

PBS洗后加入400μLＲNaseA，37℃水浴30乙醇固定，

min；再加入400μL的PI染色混匀，4℃避光30min，上机检测，记录激发波长488nm处红色荧光。Annex-