C1091 TUNEL细胞凋亡检测试剂盒_显色法_

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)

产品简介：

碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TerminalDeoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是本试剂盒通过TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。本试剂盒有如下优点。(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。(2) 特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。 (4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。本试剂盒足够检测20个样品。

tdt酶，本酶催化dNTP聚合于单链或双链DNA的3′-OH末端的反应，该反应不需要模板，但引物必须是至少有3个以上碱基的寡核苷酸

dutp生物素-16-dUTP通过缺口平移，自由引发，3-末端标记或者PCR过程以酶方式嵌入DNA

辣根过氧化物酶hrp催化DAB产生棕色沉淀

dabA,二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine，DAB）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成棕褐色不溶性产物。用于检测过氧化物酶的活性，灵敏度高，特异性好。其适用于蛋白质杂交和免疫化学，以及原位杂交染色等。

保存条件：

-20℃保存。DAB显色液A和DAB显色液B需避光保存。

注意事项：

需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)等适当的封片液，用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.1% Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106)。需自备过氧化氢，除石蜡切片外需自备甲醇。

如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1.

对于贴壁细胞或细胞涂片：a.用PBS或HBSS洗涤1次。

b.如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。

c.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。