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生物抗菌肽的研究及葡萄糖耐量因子对鼠肝胰岛素受体基因表达的影响

生物抗菌肽的研究及葡萄糖耐量因子对鼠肝胰岛素受体基因表达的

影响

【摘要】:抗菌肽(antimicrobialpeptides)是多种动物对微生物等因素侵染产生的免疫应答反应的产物,具有分子量低、热稳定、强碱性和广谱抗菌等特点。其独特的抗菌机理能在细胞质膜上形成离子通道,引起胞内物质泄露,从而杀灭细菌。当今抗生素药物是人类对付细菌等病原体引起的各类疾病的主要手段,但病原微生物的抗药性已成为不容忽视的问题。抗菌肽由于其抑制或杀灭病原微生物的特殊机理消除了病原微生物易产生抗药性这一问题,从而最有希望成为补充和替代抗生素的新型药物。由于从动物组织难于获取大量天然抗菌肽,因此利用基因工程进行抗菌肽药物开发成为人们关注的焦点。本实验主要研究的是Magainin-Protegrin杂合抗菌肽基因工程菌的构建、表达、纯化及活性测定。Magainins是爪蟾的皮肤在一定的环境压力下分泌出的抗感染和促进伤口愈合的成分,低浓度便可抑制许多细菌和真菌生长;Protegrin是1993年从猪的中性白细胞中分离得到,研究发现它具有抗爱滋病毒的功能。该实验通过取Magainin和Protegrin主要生物活性的氨基酸序列并人工合成其编码基因,在合成基因的两侧添加适当的酶切位点。利用现有蛋白结构预测软件进行分析避免空间位阻,然后在两个小的肽链之间加上起连接作用的3个氨基酸。将该序列连接到pGEX-4T-1表达载体上构成重组质粒pGEX-4T-1-MP,将该质粒转化到E.coliBL21(DE3)37℃在LB培养基中培养,至

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