蛋白提取方法汇总

蛋白质提取方法-------列举10种方法

一、植物组织蛋白质提取方法(summer)

1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。

2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。

3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

4、提取上清夜，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml

1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml

2、甘油(Glycerol)75ml

3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g

这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！

二、

植物组织蛋白质提取方法 (summer)

三氯醋酸—丙酮沉淀法

1、在液氮中研磨叶片

2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。

3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1 小时)，然后真空

干燥沉淀，备用。

4、上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm以上1小

时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。

5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

药品：

提取液：含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮

裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。

这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！

三、

组织：肠黏膜 (newinbio)

目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达

应用TRIPURE 提取蛋白质步骤：

含蛋白质上清液中加入异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量)

倒转混匀，置室温10min

离心：12000 g，10min，4度，弃上清

加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：(2ml每1mlTRIPURE 用量)

振荡，置室温20min

离心： 7500g，5 min，4 度，弃上清