当前位置： 文档下载 > 所有分类 > 自然科学 > 生物学 > CFDA-SE染料小鼠淋巴细胞增殖试验CFDA-SE染料小鼠淋巴细胞增殖试验
实验目的：探索CFDA-SE染色淋巴细胞增殖条件的探讨。
实验方法：分离一只小鼠（皮下注射免疫400ul卡波姆974+ISCOM-matrix）淋巴细胞，然后使用CFDA-SE染淋巴细胞。
方案一：①使用18ulDMSO溶解5mmgCFDA-SE冻干粉浓度为5mM储备液；
②用PBS缓冲液稀释储备液为10um工作液
③预热工作液，条件为5%CO2温箱37度，5min
④用预热的工作液重悬细胞，使浓度为1*106/ml
⑤放入37度5%CO2温箱中孵育15min
⑥离心，用预热的1640重悬细胞颗粒
⑦在37度5%CO2温箱中孵育细胞30min
⑧离心，洗涤细胞3次
⑨离心，使用1640+10%FCS重悬细胞
⑩铺板，在37度5%CO2温箱中孵育细胞3天，收获细胞，使用流式细胞仪在488nm处检测。
方案二：①用PBS配制0.1%BSA，使用0.22um滤器过滤除菌，放入5%CO2温箱37度，孵
育5min
②使用预热PBS/0.1%BSA重悬细胞，使浓度为1*106/ml
③每毫升细胞中加入2ul浓度为5mM储备液，终浓度为10uM
④放入5%CO2温箱37度，孵育30min
⑤加入5倍体积在4度存放的RPMI1640，终止染色
⑥冰上（在4度冰箱中）孵育5min
⑦离心沉淀细胞
⑧用新鲜培养基洗3次
⑨调细胞浓度，铺板
⑩在37度5%CO2温箱中孵育细胞3天，收获细胞，使用流式细胞仪在488nm处检测。
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